目的:對血人參乙酸乙酯部位化學(xué)成分進(jìn)行研究,并對分離得到的化合物進(jìn)行體外保肝活性篩選。然后再對具有保肝活性的化合物2α,3α-epoxy-5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavan-(4β→8)-epicatechin(11)的保肝作用進(jìn)行研究。方法:1.利用硅膠柱層析、MCI色譜柱、Sephadex LH-20、反相C18色譜柱、高效液相色譜法等不同色譜方法及技術(shù)進(jìn)行活性單體化合物的分離,并根據(jù)其理化性質(zhì)、波譜數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定;2.利用最佳損傷濃度和時間的對乙酰氨基酚(APAP)誘導(dǎo)人的正常肝細(xì)胞(HL-7702細(xì)胞)損傷,建立肝細(xì)胞體外損傷模型,并對分離得到的化合物進(jìn)行體外保肝活性篩選,四氮唑鹽還原法(MTT法)檢測細(xì)胞吸光度值,計算細(xì)胞存活率;3.取對數(shù)生長期HL-7702細(xì)胞按照1×10~5個/mL濃度接種到6孔板中,每孔2 mL。實驗分為3組,空白對照組;APAP損傷組;藥物保護(hù)組(40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)。置于37~oC、5%CO_2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。待細(xì)胞完全貼壁后空白組和模型組更換新的完全RPMI 1640培養(yǎng)液,藥物保護(hù)組更換為相應(yīng)濃度的含藥培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)12h后,除對照組外,其余各組加入最佳損傷濃度APAP溶液,作用12 h后,分別收集各組細(xì)胞上清液用于檢測還原性谷胱甘肽(GSH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙二醛(MDA)等指標(biāo),研究化合物11保肝作用。結(jié)果:1.從血人參乙酸乙酯部位共分離鑒定了11個化合物,經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定確定為:β-sitosterol-D-glucoside(1),五味子苷(2),山萘酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(3),豆甾醇(4),3,4,5-trimethoxy phenyl-O-β-D-Glucopyranoside(5),2-methoxy-4-(2'-hydroxyethyl)-phenol-1-O-β-D-glucopyranoside(6),2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)ethyl1-O-β-D-glucopyranosi de(7),高麗槐素(8),7-hydroxy-2-(4'-methoxyphenyl)chroman-4-one(9),毛蕊異黃酮(10),2α,3α-epoxy-5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavan-(4β→8)-epicatechin(11)。其中化合物5、化合物6、化合物7、化合物9為首次從豆科植物中分離得到;化合物3、化合物10為首次從木藍(lán)屬植物中分離得到;化合物1為首次從血人參藥材中分離得到。2.經(jīng)過體外活性篩選,發(fā)現(xiàn)化合物2、9、10、11對AP AP誘導(dǎo)的人肝HL-7702細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用,細(xì)胞存活率明顯升高;3.與模型組相比化合物11能夠使APAP誘導(dǎo)HL-7702肝細(xì)胞損傷模型中ALT、AST活性降低(p(27)0.05),MDA含量降低(p(27)0.05),GSH含量升高(p(27)0.01)。結(jié)論:1.本研究在已有研究的基礎(chǔ)之上進(jìn)一步豐富和完善了血人參的化學(xué)成分研究;2.化合物2、9、10、11在體外對對乙酰氨基酚誘導(dǎo)的人肝細(xì)胞HL-7702損傷具有保護(hù)作用,其中化合物10和化合物11保肝活性更好;3.化合物11對APAP誘導(dǎo)的人肝HL-7702細(xì)胞具有保護(hù)作用其保護(hù)作用可能是通過降低細(xì)胞中ALT、A ST活性降低,使MDA含量降低,GSH含量升高從而發(fā)揮其保肝活性。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

圖 1.3 化合物 1 結(jié)構(gòu)Figure 1.3 structure of compound 1化合物 2 白色針狀結(jié)晶(DMSO); ESI-MS m/z 491 [M H] ;1H NMR (500MHz，CD3OD) δ: 6.73 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2'), 6.69 (1H, d, J = 8.1 Hz, H-5'),6.60 (1H, s, H-2), 6.58 (1H, dd, J = 8.1, 2.0 Hz, H-6'), 6.12 (1H, s, H-5), 4.01 (2H,m, H-9), 3.93 (1H, dd, J = 9.8, 2.4 Hz, H-1''), 3.77 (1H, d, J = 5.6 Hz, H-7'), 3.76(3H, s, 3'-OCH3), 3.75 (3H, s, 3-OCH3), 3.67 (2H, m, H-9'), 3.41 (2H, m, H-5''),3.16 (2H, m, H-2'', 3''), 3.07 (1H, m, H-4''), 2.77 (2H, m, H-7), 2.02 (1H, m, H-8'),1.80 (1H, t, J = 10.4 Hz, H-8).13C NMR (126 MHz, CD3OD) δ: 148.92 (C-3'),147.15 (C-3), 145.83 (C-4'), 145.13 (C-4), 138.63 (C-1'), 134.31 (C-6), 129.10

州醫(yī)科大學(xué) 2019 屆科學(xué)學(xué)位碩士研究生學(xué)位論文具有 ABX 偶合系統(tǒng)的苯環(huán)，δ 6.60 (1H, s, H兩個氫質(zhì)子信號，δ 3.77 (1H, d, J = 5.6 Hz, H的氫信號表明結(jié)構(gòu)中含有一個β構(gòu)型的糖。給出 12 個芳香碳信號，猜想存在兩個苯環(huán)δ 77.91、δ 75.00、δ 71.26、δ 69.38 四個連氧，另外還有 8 個脂肪族碳信號，其中δ56.43其余6個中，δ 66.91和δ 65.09為兩個連氧的碳δ 33.85 為四個 SP3類型的碳信號，說明該化波譜數(shù)據(jù)同文獻(xiàn)[15]核對基本一致，確定該化）。

圖 1.6 化合物 4 結(jié)構(gòu)Figure 1.6 structure of compoun粉末（甲醇）：1H NMR (500 MHz, CD3Oz, 2H, H-1', 2'), 3.91 (dd, J = 12.0, 2.2 Hz3H, 4-OCH3), 3.65 (dd, J = 12.0, 6.7 Hz, (126 MHz, CD3OD) δ: 156.07 (C-5), 1 96.03 (2C-2, 6), 78.43 (C-5'), 78.06 (C-1.21 (4-OCH3), 56.51 (3, 5-OCH3). 波譜物 3,4,5-trimethoxyphenyl-β-D-ylucopy

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉莉;簡應(yīng)權(quán);姚廠發(fā);陳雄飛;王海洋;尚秘;;苗藥血人參規(guī)范化種植肥效試驗研究[J];中草藥;2018年05期

2 楊虹;楊宇莎;彭芳;劉杰;吳芹;郝小燕;時京珍;;血人參活性提取部位對四氯化碳肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2018年10期

3 段麗;張永萍;繆艷燕;傅建;;苗藥血人參不同提取部位體內(nèi)外對乳腺癌4T1細(xì)胞的影響[J];中草藥;2018年12期

4 劉夢鴿;徐宏;徐文芬;孫慶文;王波;陳胤睿;;苗藥血人參的HPLC指紋圖譜研究[J];貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2018年05期

5 楊宇莎;時京珍;雷鐘;周威;梁妍;劉杰;郝小燕;楊虹;;血人參乙酸乙酯部位對APAP誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J];時珍國醫(yī)國藥;2018年04期

6 扶福生;中草藥治療腦中風(fēng)經(jīng)驗方[J];蛇志;1997年02期

7 周漢華;姚廠發(fā);劉莉;馬艷妮;;血人參的生藥鑒別[J];中藥材;2012年04期

8 索貝貝;王華磊;趙致;劉紅昌;羅春麗;李金玲;羅夫來;黃明進(jìn);;血人參種子萌發(fā)特性的研究[J];種子;2013年11期

9 朱新宇;駱瀚超;何茂秋;胡朝陽;梁妍;郝小燕;;苗藥血人參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J];中國藥房;2016年27期

10 馬艷妮;劉莉;魏俊蓮;呂興文;周漢華;;血人參的薄層色譜鑒別及水分、灰分、浸出物測定[J];中國民族民間醫(yī)藥;2011年23期

相關(guān)會議論文 前2條

1 曹逸民;;血人參的臨床應(yīng)用[A];全國基層中醫(yī)臨床應(yīng)用學(xué)術(shù)會論文集[C];1996年

2 王雷鳴;梁冰;李淑芳;郝小燕;劉莉;;復(fù)方血人參對環(huán)磷酰胺減毒作用的初步研究[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 雷鐘;血人參化學(xué)成分及其保肝活性研究[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2019年

2 楊宇莎;血人參對小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)制研究[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2018年

3 傅建;苗藥血人參及艾納香化學(xué)成分的研究[D];貴陽中醫(yī)學(xué)院;2013年

4 朱新宇;血人參乙酸乙酯部位化學(xué)成分及其保肝活性初步研究[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2016年

本文編號：2816082