目的:肝蘇顆粒是由苗藥趕黃草開發(fā)的治療肝炎的中成藥。本研究擬探討其對(duì)肝纖維化的藥效作用及其機(jī)制。方法:1.化學(xué)性肝纖維化大鼠試驗(yàn):選擇健康成年SD大鼠,采用CCl_4灌胃合高脂高膽固醇低蛋白飼料喂飼法建立大鼠化學(xué)性肝纖維化模型。按體重隨機(jī)分為6組,即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、秋水仙堿組(0.0001g/kg)、和肝蘇顆粒高、中、低劑量組(16.7、8.4、4.2g/kg)。灌胃給藥9周,觀察大鼠一般狀態(tài)。末次給藥后各組大鼠股動(dòng)脈取血,測(cè)定血清ALT、AST、TBIL、ALP、ALB、TP含量或活性;并取肝、脾稱重計(jì)算臟器系數(shù);采用ELISA法測(cè)定肝組織中HA、LN、MMP-1及TIMP-1含量;另取部分肝組織行HE染色、Masson染色觀察組織病理學(xué)變化;免疫組織化學(xué)法(SABC法)檢測(cè)肝組織內(nèi)α-SMA、TGF-β_1的表達(dá)情況。2.免疫性肝纖維化大鼠試驗(yàn):選擇健康成年SD大鼠,采用豬血清腹腔注射法造大鼠免疫性肝纖維化模型;參照前法分組、灌胃給藥10周,觀察大鼠一般狀態(tài),實(shí)驗(yàn)?zāi)┤⊙獪y(cè)定血清ALT、AST、TBIL、ALP、ALB、TP含量或活性;取肝、脾稱重計(jì)算臟器系數(shù),ELISA法測(cè)定肝組織HA、LN、MMP-1、TIMP-1、PCⅢ、α-SMA及TGF-β_1含量,另取部分肝組織行HE染色及Masson染色觀察組織病理學(xué)形態(tài)變化。3.膽管阻塞性肝纖維化大鼠試驗(yàn):采用膽總管結(jié)扎法建立大鼠膽管阻塞性肝纖維化模型,并按體重隨機(jī)分為模型對(duì)照組、秋水仙堿組(0.0001g/kg)和肝蘇顆粒組(16.7g/kg),另設(shè)假手術(shù)組,灌胃給藥8周后,檢測(cè)各組大鼠肝功能和肝組織病理學(xué)變化。結(jié)果:1.肝蘇顆�？勾笫驝Cl_4致肝纖維化實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠ALT、AST、TBIL、ALP明顯升高,TP明顯下降(P0.01),肝組織HA、LN、TIMP-1水平明顯升高(P0.01),肝、脾系數(shù)顯著升高而胸腺系數(shù)降低(P0.01);肝臟質(zhì)地變硬,病理學(xué)檢測(cè)見典型假小葉形成,免疫組化檢測(cè)顯示肝組織TGF-β_1、α-SMA表達(dá)明顯增強(qiáng)。與模型對(duì)照組比較,秋水仙堿組和肝蘇顆粒各組大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL水平和肝組織中HA、TIMP-1水平均顯著下降,血清球蛋白明顯增加(P0.01),肝蘇顆粒低劑量組的血清ALB含量明顯增加(P0.05);病理學(xué)檢測(cè)顯示各給藥組纖維化程度有不同程度改善,肝組織TGF-β_1、α-SMA表達(dá)減弱。2.肝蘇顆�？勾笫竺庖咝愿卫w維化實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL水平明顯升高,ALB含量明顯下降,肝脾系數(shù)均顯著升高,胸腺系數(shù)顯著降低,肝組織HA、LN、PCⅢ、TIMP-1,α-SMA、TGF-β_1含量明顯升高(P0.05或P0.01),肝臟質(zhì)地變硬,病理學(xué)檢測(cè)見大量纖維化增生改變及假小葉形成。與模型對(duì)照組比較,各給藥組血清ALT、AST、ALP、TBIL均明顯下降,肝組織HA、LN、PCⅢ和TIMP-1水平明顯降低,肝蘇顆粒高,低劑量組還明顯降低肝臟系數(shù),低劑量組還可降低脾臟系數(shù),秋水仙堿組及肝蘇顆粒中劑量組α-SMA、TGF-β_1水平和肝蘇顆粒低劑量組TGF-β_1水平均明顯降低,以上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或P0.01);各給藥組纖維化程度有不同程度改善。3.肝蘇顆�？勾笫竽懣偣茏枞愿卫w維化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL球蛋白水平明顯升高,肝臟系數(shù)顯著升高,ALB含量及白球比值均明顯下降(P0.05或P0.01),HE顯示肝組織出現(xiàn)輕至中度的纖維化。與模型對(duì)照組比較,秋水仙堿組和肝蘇顆粒組血清ALT、AST、TBIL、ALP、DBIL及球蛋白含量均明顯下降,肝臟系數(shù)降低,秋水仙堿組的脾臟系數(shù)也明顯降低(P0.05或P0.01),ALB含量及白球比值有增加。病理學(xué)顯示秋水仙堿組和肝蘇顆粒組肝臟纖維化程度與模型對(duì)照組比較有所減輕。結(jié)論:肝蘇顆粒對(duì)大鼠CCl_4致化學(xué)性肝纖維化模型、膽管阻塞性肝纖維化模型和免疫性肝纖維化模型均有治療作用,可明顯改善肝功能和減輕肝臟纖維化變,機(jī)制是減輕肝臟脂質(zhì)過氧化損傷,抑制膠原蛋白沉積和促進(jìn)膠原降解,從而減少細(xì)胞外基質(zhì)沉積和降低α-SMA和TGF-β_1的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

D E F圖 1 肝蘇顆粒對(duì) CCl4致肝纖維化大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響（HE 染色，100×；A．正常對(duì)照組；B．模型對(duì)照組；C．秋水仙堿組；D、F 分別為肝蘇顆粒高、中、低劑量組）A B CD E F

11D E F圖 2 肝蘇顆粒對(duì) CCl4致肝纖維化大鼠肝組形態(tài)學(xué)的影響（Masson 染色，100×；A．正常對(duì)照組；B．模型對(duì)照組；C．秋水仙堿組；D、E、F 分別為肝蘇顆粒高、中、低劑量組）對(duì)病變進(jìn)行評(píng)分結(jié)果見下表 4。與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組評(píng)分明顯升高，差異有顯著性意義(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較，各給藥組評(píng)分都降低，肝蘇顆粒中，低劑量和秋水仙堿可顯著降低肝纖維化評(píng)分（P＜0.05 或 P＜0.01）。

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2017 屆碩士學(xué)位論文有少量表達(dá)；模型對(duì)照組 TGF-β1陽性表達(dá)明顯增強(qiáng)，廣泛分布于變性的肝細(xì)胞，纖維化區(qū)，肝竇區(qū)，匯管區(qū)，血管壁及部分膽管細(xì)胞；肝蘇顆粒各劑量組和秋水仙堿組 TGF-β1陽性表達(dá)量明顯減少，以低劑量組效果最好，高，中劑量組表達(dá)稍強(qiáng)。結(jié)果見圖 4。采用 image pro plus 6.0 進(jìn)行兩個(gè)因子表達(dá)的平均光密度AOD 測(cè)定，具體數(shù)值見表 6。結(jié)果提示，肝蘇顆粒能明顯減少 CCl4導(dǎo)致的肝纖維化大鼠肝組織中α-SMA，TGF-β1的表達(dá)，以肝蘇顆粒低劑量組效果最好。

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本文編號(hào)：2814450