【摘要】：目的:探討芍藥苷(paeoniflorin,PF)對(duì)肝缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)損傷的保護(hù)作用并探討其作用機(jī)制。方法:將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為:假手術(shù)組(Control組)、芍藥苷對(duì)照組(PF組)、肝缺血再灌注損傷模型組(IR組)、芍藥苷干預(yù)組(PF+IR組),共四組。其中芍藥苷給予劑量為100 mg/kg,分三次灌胃給藥。模型組和藥物干預(yù)組小鼠肝缺血1.5 h再灌注6 h,檢測(cè)血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活性,酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子-?(tumor necrosis factor-?,TNF-?)和白細(xì)胞介素-1?(interleukin-1?,IL-1?)的水平。蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色后鏡下觀察組織損傷的形態(tài)學(xué)變化,末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口末端標(biāo)記測(cè)定法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL)法結(jié)合Caspase-3試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況和Caspase-3活性水平。組織免疫化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)法測(cè)定高遷移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)的表達(dá),定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)法檢測(cè)細(xì)胞膜上模式識(shí)別受體Toll樣受體4(toll like receptor 4,TLR4)和炎癥因子TNF-?、IL-1?mRNA的水平。免疫熒光法(immunofluorescence,IF)和流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)檢測(cè)中性粒細(xì)胞的數(shù)量和表達(dá)變化。Western blot進(jìn)一步檢測(cè)TLR4及下游信號(hào)分子:磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化的p38(phosphorylated p38,p-p38)以及磷酸化的轉(zhuǎn)錄因子NF-?B(phosphorylated NF-?B,p-NF-?B)蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果:與Control組相比,IR組血清中轉(zhuǎn)氨酶活性明顯升高,芍藥苷干預(yù)后血清中ALT、AST降低,HE染色和TUNEL結(jié)果顯示芍藥苷抑制了肝細(xì)胞凋亡,減輕了肝缺血再灌注誘導(dǎo)的損傷。芍藥苷可下調(diào)炎癥因子TNF-?、IL-1?的mRNA水平以及蛋白表達(dá)水平,而且抑制了中性粒細(xì)胞的活化和募集。芍藥苷下調(diào)HMGB1和TLR4,也降低了p-JNK、p-ERK、p-p38以及p-NF-?B的蛋白表達(dá)水平。結(jié)論:芍藥苷對(duì)小鼠肝缺血再灌注誘導(dǎo)的損傷確實(shí)具有保護(hù)作用,可能是通過(guò)作用于HMGB1及TLR4-MAPKs信號(hào)通路減少了炎癥因子TNF-?、IL-1?的釋放減少了細(xì)胞凋亡,同時(shí)抑制中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)阻止炎癥反應(yīng)放大以達(dá)到保護(hù)肝臟的作用。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2803262