【摘要】：中藥材蒺藜為蒺藜科蒺藜屬植物蒺藜(Tribulus terrestris L.)的干燥成熟果實(shí),具有抗衰老、抗菌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)血脂、降血糖、抑癌、利尿、性強(qiáng)壯、抑制酪氨酸酶等藥理作用,常用于治療冠心病、心絞痛、腦血栓、糖尿病、高血脂等疾病。本文從蒺藜的水提物中分離得到21個(gè)單體化合物(JL-1~JL-21),利用1D-NMR、2D-NMR、MS、IR等波譜學(xué)手段,結(jié)合其理化性質(zhì),鑒定出其中19個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu),其中3個(gè)為新化合物,3個(gè)為首次從蒺藜中分得的化合物。新化合物分別為26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-18)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-19)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-3β,22α,26-三醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-21)。首次分得的化合物分別為吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-6)、曼諾皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-1)、新海柯皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-9)。在研究化學(xué)成分的基礎(chǔ)上,本文建立了蒺藜中8種螺甾型皂苷的SPE-HPLC-ELSD含量測(cè)定方法。這8種螺甾型皂苷分別為曼諾皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-1)、�？略碥赵�-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-2)、(25R,S)-�？略碥赵�-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-3)、�？略碥赵�-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-4)、(25R,S)吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-5)、吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-6)、替告皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[α-L吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-7)和�？略碥赵�(JL-8)。首先,通過(guò)對(duì)提取溶劑種類(lèi)、提取方法、提取溶劑用量、提取次數(shù)以及SPE種類(lèi)及洗脫條件等因素的考察,確立了最佳提取與富集方法。其次,進(jìn)行了方法學(xué)考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,化合物JL-1、JL-2、JL-3、JL-4和JL-7在0.40~20.00μg范圍內(nèi)峰面積y(lgS_均)和進(jìn)樣濃度x(lgm)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系,化合物JL-5、JL-6、JL-8在0.20~10.00μg范圍內(nèi)峰面積y(lgS_均)和進(jìn)樣濃度x(lgm)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。化合物JL-1~JL-8的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性以及加樣回收率的RSD值均小于2.0%,說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)所建立的含量測(cè)定方法具有精密度好、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。含量測(cè)定結(jié)果表明,不同產(chǎn)地蒺藜藥材中化合物JL-1~JL-8的含量差別不是很明顯,8種螺甾型皂苷的平均含量分別為0.049 mg·g~(-1)(JL-1),0.105 mg·g~(-1)(JL-2),0.125 mg·g~(-1)(JL-3),0.063 mg·g~(-1)(JL-4),0.050 mg·g~(-1)(JL-5),0.039 mg·g~(-1)(JL-6),0.081 mg·g~(-1)(JL-7),0.013 mg·g~(-1)(JL-8)。本文還利用大孔吸附樹(shù)脂分離方法制備了蒺藜總呋甾皂苷和蒺藜總螺甾皂苷,并對(duì)二者的清除羥基自由基活性、抑制酪氨酸酶活性以及抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖活性進(jìn)行了對(duì)比研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蒺藜總螺甾皂苷和總呋甾皂苷均具有清除羥基自由基、抑制酪氨酸酶及抑制肺癌A549細(xì)胞增殖的活性,其中蒺藜總螺甾皂苷的活性?xún)?yōu)于蒺藜總呋甾皂苷。綜上所述,本論文從蒺藜的水提物中分離出21個(gè)單體化合物,鑒定了19個(gè)單體化合物,其中3個(gè)為新化合物,3個(gè)為首次從蒺藜中分得的化合物;建立了蒺藜中8種螺甾型皂苷的SPE-HPLC-ELSD含量測(cè)定方法;研究了蒺藜總螺甾皂苷和蒺藜總呋甾皂苷的3種生物活性。本論文的研究結(jié)果為蒺藜藥效物質(zhì)的深入研究,蒺藜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善以及蒺藜中甾體皂苷類(lèi)化合物的應(yīng)用研究提供了新的科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R284;R285
【圖文】：

化合物 JL-19 的化學(xué)結(jié)構(gòu)式和 HMBC 相關(guān)譜見(jiàn)圖 2.6 和 2.7，核磁數(shù)據(jù)見(jiàn)表2.5�；衔� JL-18 和化合物 JL-19 均未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，故確認(rèn)化合物 JL-18 和化合物 JL-19 為新化合物。OOR2R1OHHOOHR1=-β-D-Gal4-1β-D-GlcR2=-β-D-Glc圖 2.4 化合物 JL-18 的結(jié)構(gòu)式

圖 2.7 化合物 JL-19 的 HMBC 相關(guān)表 2.5 JL-19 的13C NMR(150MHz)和1H NMR(600MHz)數(shù)據(jù)(δ,ppm,C5D5N)Position JL-19 Position JL-19cHcH123456789101112131445.870.684.934.144.828.232.434.754.537.021.640.241.256.42.09(m)4.47(m)3.72(m)1.36(m)0.96(m)1.03(m)1.16(m)1.12(dd)0.49(dd)-----1.30(m)1.00(m)-----0.90(s)3-O-Gal 1234564-Glc 12345626-O-Glc 12103.673.275.580.375.961.0107.376.178.872.478.963.2105.375.34.83(d ,J=7.8Hz)4.34(m)4.12(m)4.58(m)3.97(m)4.19(m)5.20(d ,J=7.8Hz)4.17(m)4.04(m)3.97(m)3.99(m)4.37 (m)4.63(d ,J=7.8Hz)3.71(m)

B.樣品溶液圖 3.1 化合物 JL-1～JL-8 的高效液相譜圖3.3 提取條件的考察為保證蒺藜干燥果實(shí)中化合物 JL-1~JL-8 能夠提取完全，實(shí)驗(yàn)中以 JL-1~JL-8的色譜峰面積為考察指標(biāo)，對(duì)提取溶劑、提取方法、液料比和提取次數(shù)這四個(gè)影響因素進(jìn)行了考察。3.3.1 提取溶劑考察取蒺藜干燥果實(shí)，粉碎，過(guò) 60 目篩，精密稱(chēng)取 4 份，每份 5.0g。分別用 50mL 水、丙酮、甲醇、乙酸乙酯為提取溶劑進(jìn)行提取，每份藥材加熱回流提取 1次，時(shí)間均為 2.0 h，合并提取液，減壓回收溶劑，加入適量蒸餾水溶解，過(guò) AB-8SPE 固相萃取小柱，40%乙醇-水淋洗，再以 85%乙醇-水洗脫，回收溶劑至干，

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2801722