【摘要】：細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷(Tenuifolin,Ten)是從遠(yuǎn)志中提取的主要活性成分。中藥遠(yuǎn)志(Polygala tenuifolia)具有安神益智的功能,傳統(tǒng)上常用于提高記憶力和治療癡呆癥。有研究表明,遠(yuǎn)志具有減少Aβ異常沉積,抑制Tau蛋白磷酸化,調(diào)節(jié)膽堿酯酶系統(tǒng)功能,減少炎性介質(zhì)的產(chǎn)生,抑制谷氨酸過度釋放引起的神經(jīng)毒性,抗氧化和抑制細(xì)胞凋亡等作用,從而發(fā)揮抗AD及神經(jīng)保護(hù)作用。但Ten發(fā)揮抗AD活性的具體作用和分子機(jī)制還有待進(jìn)一步闡明,尤其是Ten對(duì)Aβ產(chǎn)生及Aβ毒性作用的影響和分子機(jī)制。本論文研究了Ten通過調(diào)控細(xì)胞自噬在抗Aβ誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷中的作用,探討了Ten調(diào)控自噬信號(hào)通路的分子機(jī)制,為細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷應(yīng)用于AD治療提供新的靶點(diǎn)和科學(xué)依據(jù)。具體內(nèi)容如下:1、Ten調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬對(duì)Aβ誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)和活力的研究:MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,結(jié)果顯示,50μM Ten可以改善SH-SY5Y細(xì)胞中20μM Aβ25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)和提高Aβ25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞活力,而自噬抑制劑3-MA能拮抗Ten的保護(hù)作用。結(jié)果表明Ten通過激活自噬改善了Aβ25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)損傷和細(xì)胞活力下降。2、Ten調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬對(duì)Aβ誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激的研究:DCFH-DA熒光探針測(cè)定ROS水平,硫代巴比妥酸(TBA)測(cè)定MDA水平,WST-8法測(cè)定SOD活性,NADPH法測(cè)定GSH-Px活性,紫外線吸收法測(cè)定CAT活性,結(jié)果顯示,Ten能夠降低Aβ25-35誘導(dǎo)ROS和MDA濃度,并提高SOD、GSH-Px及CAT的活性,而加入自噬抑制劑3-MA會(huì)拮抗Ten的抗氧化作用。結(jié)果表明,Ten通過激活自噬減輕Aβ25-35誘導(dǎo)產(chǎn)生的氧化應(yīng)激損傷,提高了細(xì)胞抗氧化能力。3、Ten調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬對(duì)Aβ誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞炎癥反應(yīng)的研究:RT-PCR檢測(cè)IL-1β、IL-6和TNF-ɑm RNA的表達(dá)水平變化,結(jié)果顯示,Ten能降低Aβ25-35誘導(dǎo)的IL-1β、IL-6和TNF-ɑm RNA的表達(dá)水平,而加入3-MA會(huì)拮抗Ten的抗炎作用。結(jié)果表明,Ten通過激活自噬顯著減輕SH-SY5Y細(xì)胞中Aβ25-35誘導(dǎo)的炎癥損傷。4、Ten調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞中Aβ產(chǎn)生的研究:RT-PCR檢測(cè)APP和BACE1 m RNA的表達(dá)水平變化,Elisa檢測(cè)BACE1、Aβ_(1-40)和Aβ1-42水平,結(jié)果顯示,Ten能顯著降低SH-SY5Y細(xì)胞中Aβ25-35誘導(dǎo)的BACE1 m RNA的表達(dá)水平和BACE1、Aβ_(1-40)和Aβ1-42的濃度,而Ten和Aβ25-35對(duì)APP m RNA的表達(dá)水平無顯著影響,加入3-MA會(huì)拮抗Ten減少Aβ產(chǎn)生的作用。結(jié)果表明,Ten通過激活自噬抑制SH-SY5Y細(xì)胞中BACE1的活性,從而減少Aβ產(chǎn)生。5、Ten對(duì)Aβ誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的分子機(jī)制研究:RT-PCR和western檢測(cè)Beclin-1、LC3、m TOR、AMPK和ULK1 m RNA及蛋白水平變化,結(jié)果顯示,Aβ25-35能增加SH-SY5Y細(xì)胞中Beclin-1、LC3 m RNA和Beclin-1蛋白水平的表達(dá),不影響LC3-II/I的值,Ten能進(jìn)一步增加Aβ25-35誘導(dǎo)的Beclin-1和LC3的表達(dá),而3-MA能抑制Ten誘導(dǎo)自噬的作用。Aβ25-35能減少SH-SY5Y細(xì)胞中AMPK和ULK1 m RNA及蛋白的表達(dá)水平,增加m TOR m RNA及蛋白的表達(dá)水平,而Ten能增加AMPK和ULK1的表達(dá),減少m TOR的表達(dá)。結(jié)果表明,Ten可能通過調(diào)控AMPK/m TOR/ULK1通路和增加Beclin-1及LC3-II/I的表達(dá)而增強(qiáng)細(xì)胞自噬水平。綜上所述,Ten能抑制Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞毒性,其分子機(jī)制可能是:Ten通過調(diào)控AMPK/m TOR/ULK1通路,增加Beclin-1及LC3-II/I蛋白水平激活自噬,從而降低BACE1活性和減少Aβ分泌,進(jìn)而改善Aβ25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)損傷和細(xì)胞活力下降,提高細(xì)胞抗氧化應(yīng)激能力,減輕炎癥損傷,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285
【圖文】：

Ten+Aβ+3-MA 組圖 2-1 Ten 調(diào)節(jié)細(xì)胞自2.4.2 Ten 調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬對(duì) Aβ誘導(dǎo)的細(xì)胞用 MTT 法研究 Ten 和 3-MA 對(duì) SH與 Aβ25-35(20 μM)共同培養(yǎng) 24h，用 MTAβ(20 μM)作用于 SH-SY5Y 細(xì)胞 24h 后control)，Ten(50μM)單獨(dú)作用對(duì)細(xì)胞活胞活力，但與對(duì)照組相比無顯著性差異制劑 3-MA(10mM)共孵育 2 h，再用 Aβ力，結(jié)果顯示，Ten(50 μM)+Aβ(20μM)組

Ten 調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬對(duì) Aβ誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞活力的影響 (與對(duì)照組比較：**P<0.01；與 Aβ組比較：#P<0.05，##P<0.0細(xì)胞自噬對(duì) Aβ誘導(dǎo)的 ROS 和 MDA 的影響節(jié)細(xì)胞自噬對(duì) Aβ誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞中 ROS 水平 Ten 對(duì) Aβ誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞中 ROS 產(chǎn)生的影響M 的 3-MA 預(yù)處理細(xì)胞 2h，再加入 20μM 的 Aβ25-35二氫熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)熒光探針預(yù)孵育 30三次后用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè) ROS 的產(chǎn)生量。結(jié)果如圖 β能顯著增加 SH-SY5Y 細(xì)胞中 ROS 的產(chǎn)生(*P<0.05 en 能顯著減少 ROS 的產(chǎn)生(#P<0.05 vs Aβ model)，而的產(chǎn)生。結(jié)果表明，Ten 能激活自噬減少 Aβ誘導(dǎo)的 R

細(xì)胞自噬對(duì) Aβ誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞中 ROS 水平的組比較：*P<0.05，**P<0.01；與 Aβ組比較：#P<0.05細(xì)胞自噬對(duì) Aβ誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞中 MDA 水en 對(duì) Aβ誘導(dǎo)的 SH-SY5Y 細(xì)胞中 MDA 產(chǎn)生的養(yǎng) 12h，用 50μM 的 Ten 和 10mM 的 3-MA 預(yù)處5-35共同作用 24h，按照 MDA 檢測(cè)試劑盒說明書與對(duì)照組相比，Aβ能顯著增加 SH-SY5Y 細(xì)胞中ntrol)，與 Aβ組相比，Ten 能顯著減少 MDA 的產(chǎn)生A 能進(jìn)一步增加 MDA 的產(chǎn)生。結(jié)果表明，Ten 水平。

【參考文獻(xiàn)】

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1 鄒文穎;付劍亮;;自噬調(diào)控機(jī)制對(duì)阿爾茲海默病的影響[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2015年07期

2 宋玉菲;付劍亮;;阿爾茨海默病與氧化應(yīng)激[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2015年03期

3 張亞新;杜歡;;Aβ誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)在阿爾茨海默病的研究進(jìn)展[J];天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年06期

4 呂歡歡;張娜;宋軍營;呂靖;王叢笑;賈亞泉;張振強(qiáng);;阿爾茨海默病炎癥機(jī)制研究進(jìn)展[J];中醫(yī)學(xué)報(bào);2014年11期

5 皮婷;薛小燕;羅煥敏;;遠(yuǎn)志皂苷元神經(jīng)營養(yǎng)作用研究[J];中藥材;2013年09期

6 倪嘉纘;陳平;劉瓊;鄭易之;何曉陽;宋國麗;應(yīng)明;續(xù)旭;;阿爾茨海默病的防治策略研究進(jìn)展[J];深圳大學(xué)學(xué)報(bào)(理工版);2013年04期

7 趙美順;陳敬榮;楊紅;;β淀粉樣蛋白神經(jīng)毒性與線粒體功能異常研究進(jìn)展[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2012年06期

8 張于;程偉;;中西醫(yī)治療阿爾茲海默病的研究現(xiàn)狀[J];中醫(yī)臨床研究;2012年13期

9 別曼;徐穎;胡慧玲;逯丹;朱麗紅;戚仁斌;王華東;陸大祥;;遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)氧化應(yīng)激損傷的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用[J];中國病理生理雜志;2012年06期

10 劉曉杰;楊威;祁金順;;氧化應(yīng)激與阿爾茨海默病[J];生理學(xué)報(bào);2012年01期

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2 宋宇;雷帕霉素對(duì)大鼠脊髓損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2015年

3 姜洋;補(bǔ)腎祛瘀化痰法對(duì)輕度認(rèn)知功能損害患者認(rèn)知功能及氧化應(yīng)激影響的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2014年

4 王笑笑;擬人參皂苷-F11抑制脂多糖誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞活化及對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用研究[D];沈陽藥科大學(xué);2014年

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2 呂紅明;遠(yuǎn)志皂苷元對(duì)急性肺損傷的作用及機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2016年

3 鄭堯杰;遠(yuǎn)志皂苷對(duì)Aβ誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞功能與細(xì)胞周期的調(diào)控及其轉(zhuǎn)運(yùn)清除的作用[D];廣東藥科大學(xué);2016年

4 王倩;遠(yuǎn)志皂苷水解物的藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

本文編號(hào)：2795319