【摘要】：目的利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropy ridine,MPTP)建立帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠模型,研究紅景天苷(Salidroside,Sal)對腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensinsystem,RAS)中AngⅡ-AT1軸的調(diào)節(jié)作用,及其對NADPH氧化酶、ROS、SOD與MDA的影響,探討紅景天苷發(fā)揮多巴胺能神經(jīng)元保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法將123只雄性C57/BL小鼠隨機(jī)分為3組(n=41)。1)對照組:腹腔注射生理鹽水,每天1次,連續(xù)注射7天;2)模型組:腹腔注射MPTP(30mg/kg),每天1次,連續(xù)注射7天;3)治療組:腹腔注射MPTP(30mg/kg),1 h后腹腔注射Sal(50mg/kg),每天1一次,連續(xù)注射7 d;每次注射完畢后,觀察每組小鼠行為學(xué)表現(xiàn),并使用爬桿法測定小鼠運(yùn)動(dòng)能力;采用免疫組織化學(xué)圖像分析,測定每組小鼠中腦黑質(zhì)區(qū)TH和NOX2陽性表達(dá)量;采用蛋白質(zhì)印跡法,測定每組小鼠中腦TH、AngⅡ、AT1和NOX2蛋白表達(dá)水平;采用試劑盒測定每組小鼠中腦黑質(zhì)區(qū)SOD、MDA和ROS的水平。結(jié)果1與對照組相比,模型組小鼠表現(xiàn)出步態(tài)不穩(wěn)、豎尾、震顫等典型帕金森病樣行為學(xué)表現(xiàn),自主活動(dòng)減緩,隨著給藥次數(shù)增加,這些表現(xiàn)愈發(fā)明顯;爬桿實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組小鼠得分顯著減小(8.24±0.54 vs 3.73±0.51,P0.01),說明模型組小鼠爬行時(shí)間延長,運(yùn)動(dòng)平衡協(xié)調(diào)能力減弱;與模型組相比,Sal治療組小鼠行為學(xué)癥狀減輕;爬桿實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,治療組小鼠得分增加(3.37±0.51 vs 5.96±1.07,P0.01),說明經(jīng)過Sal治療后,治療組小鼠運(yùn)動(dòng)平衡協(xié)調(diào)能力有所提高。2免疫組化結(jié)果顯示,模型組小鼠較之對照組TH陽性神經(jīng)元數(shù)量大幅度減少(120.73±15.04 vs 46.93±12.59,P0.01),NOX2陽性細(xì)胞顯著增加(10.09±1.10 vs 60.01±7.45,P0.01);蛋白質(zhì)免疫印跡分析顯示,與對照組相比,模型組小鼠TH蛋白表達(dá)水平顯著降低(1.68±0.075 vs 0.55±0.118,P0.01)、AngⅡ(0.60±0.051 vs 0.80±0.071,P0.01)、AT1(0.18±0.014 vs 0.36±0.015,P0.01)及NOX2(0.41±0.03 vs 1.04±0.07,P0.01)表達(dá)水平升高;試劑盒檢測結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組小鼠中腦黑質(zhì)區(qū)SOD活力下降(123.15±13.33 vs 85.96±13.22,P0.01)、ROS(47.74±7.88 vs 102.88±11.22,P0.01)及MDA(0.85±0.088 vs 1.30±0.081,P0.01)產(chǎn)生增多,說明給予MPTP處理后,RAS中AngⅡ-AT1軸可影響NOX2、SOD、ROS和MDA產(chǎn)生水平,使中腦黑質(zhì)發(fā)生氧化應(yīng)激損傷,從而促使神經(jīng)元變性壞死。3與模型組相比,治療組小鼠免疫組化結(jié)果顯示,TH陽性神經(jīng)元丟失程度減輕(46.93±12.59vs 76.03±18.02,P0.01),NOX2陽性細(xì)胞減少(60.01±7.45 vs 35.05±5.49,P0.01);蛋白質(zhì)免疫印跡分析顯示,與模型組相比,治療組小鼠中腦黑質(zhì)區(qū)TH(0.55±0.118 vs 1.02±0.085,P0.01)及AngⅡ(0.80±0.071 vs 1.08±0.128,P0.01)表達(dá)水平升高,AT1(0.36±0.015 vs 0.26±0.028,P0.01)及NOX2(1.04±0.07 vs 0.69±0.05,P0.01)表達(dá)水平下降;試劑盒檢測結(jié)果顯示,治療組小鼠SOD活力升高(85.96±13.22 vs 100.74±11.53,P0.01),ROS(102.88±11.22 vs 68.86±8.04,P0.01)及MDA(1.30±0.081 vs 1.04±0.079,P0.01)產(chǎn)生量減少,說明給予Sal治療后,可通過調(diào)節(jié)AngⅡ-AT1軸,減少NOX2、ROS及MDA產(chǎn)生,起到抗氧化應(yīng)激損傷效應(yīng),發(fā)揮保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元的作用。結(jié)論Sal在一定程度上可通過調(diào)節(jié)RAS中AngⅡ-AT1軸表達(dá),影響NDAPH氧化酶活性,保護(hù)抗氧化系統(tǒng)SOD活力,減少氧化應(yīng)激產(chǎn)物ROS和MDA產(chǎn)生,從而減輕模型動(dòng)物中腦黑質(zhì)區(qū)的氧化應(yīng)激損傷,最終發(fā)揮保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元的效應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

*P＜0.05 vs. control group.#P＜0.05 vs. model group.圖 1 各組小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)得分ig.1 The score of pole test comparison among the groups(n=1學(xué)檢測結(jié)果腦黑質(zhì) TH 陽性神經(jīng)元表達(dá)檢測結(jié)果檢測結(jié)果顯示，對照組黑質(zhì)致密部 TH 陽性神經(jīng)元元數(shù)量多，分布密集，神經(jīng)纖維清晰；模型組與對整，TH 陽性神經(jīng)元大量減少，減少達(dá) 61.13%，神比，TH 陽性神經(jīng)元只減少了 37.02%，神經(jīng)纖維較TH 陽性神經(jīng)元丟失程度減輕，TH 陽性神經(jīng)元完整，神經(jīng)纖維清晰（圖 2）。對圖像結(jié)果進(jìn)行數(shù)學(xué)意義（P＜0.01，表 2，圖 3）。

*P＜0.05 vs. control group.#P＜0.05 vs. model group.圖 1 各組小鼠爬桿實(shí)驗(yàn)得分Fig.1 The score of pole test comparison among the groups(n=10)1.2.3 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果1）各組小鼠中腦黑質(zhì) TH 陽性神經(jīng)元表達(dá)檢測結(jié)果TH 免疫組化檢測結(jié)果顯示，對照組黑質(zhì)致密部 TH 陽性神經(jīng)元呈條帶狀且排列規(guī)則，陽性神經(jīng)元數(shù)量多，分布密集，神經(jīng)纖維清晰；模型組與對照組相比，黑質(zhì)致密部形狀不完整，TH 陽性神經(jīng)元大量減少，減少達(dá) 61.13%，神經(jīng)纖維稀疏；治療組與對照組相比，TH 陽性神經(jīng)元只減少了 37.02%，神經(jīng)纖維較稀疏；治療組與模型組相比，TH 陽性神經(jīng)元丟失程度減輕，TH 陽性神經(jīng)元較模型組多62.01%，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，神經(jīng)纖維清晰（圖 2）。對圖像結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，三組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，表 2，圖 3）。

*P＜0.05 vs. control group. #P＜0.05 vs. model group圖 3 小鼠中腦黑質(zhì)致密部 TH 陽性神經(jīng)元測定值red values of TH positive expression in the SN of the mid黑質(zhì) NOX2 陽性表達(dá)檢測結(jié)果檢測結(jié)果顯示，對照組黑質(zhì)區(qū) NOX2 陽性細(xì)組 NOX2 陽性細(xì)胞多，分布密集，可見核濃照組相比，NOX2 陽性細(xì)胞少量增多，治療組分布彌散，胞漿染色較淺（圖 4）。對圖像有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，表 3，圖 5）。

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3 李s

本文編號：2794777