【摘要】：桑黃是一種珍稀食藥用真菌,近些年的研究表明桑黃含有多種活性成分,具有抗腫瘤、降血壓、抗氧化等多種藥理作用。但由于桑黃生長對環(huán)境要求高、周期長,物質(zhì)基礎的研究不夠使得桑黃資源的開發(fā)利用進程緩慢。本論文首先對I.baumii發(fā)酵主產(chǎn)物進行分離鑒定,然后對大孔樹脂分離主產(chǎn)物的條件進行優(yōu)化,最后建立I.baumii發(fā)酵與樹脂分離耦合的新工藝,為I.baumii資源的開發(fā)利用提供科學依據(jù)。本論文成功從I.baumii發(fā)酵液中分離出主產(chǎn)物,經(jīng)波譜學鑒定為一種新的二聚hispidin類化合物,將其命名為桑黃素LA,該化合物對DPPH~-、O_2~-、OH~-、ABTS~+自由基有較強的清除能力,總抗氧化能力為23.99 U/mL。然后采用ADS-17樹脂對發(fā)酵液中的桑黃素LA進行分離,響應面優(yōu)化靜態(tài)吸附的最佳條件為pH 5.19、液料比5.11、吸附溫度22.81℃,吸附率達97.11%,洗脫最佳條件為70%乙醇溶液。該樹脂吸附過程符合Freundlich模型,為自發(fā)進行的放熱過程,以氫鍵為主要吸附力。吸附動力學符合二級動力學方程,吸附速度很快,且吸附速率是由液膜擴散和孔內(nèi)擴散共同控制。自制發(fā)酵反應器與樹脂層析柱吸附分離異位耦合,在第7天以1 mL/min向?qū)游鲋斜萌氚l(fā)酵液,然后用70%乙醇以5 mL/min洗脫層析柱中吸附的桑黃素LA,循環(huán)培養(yǎng)到第9天后結(jié)束發(fā)酵。采用新工藝使發(fā)酵液中的桑黃素LA產(chǎn)量提升了2.14倍,樹脂層析柱純化的桑黃素LA含量為97.53%,該新工藝能有效提升I.baumii發(fā)酵產(chǎn)桑黃素LA的產(chǎn)量并且分離效果顯著。本課題首次從I.baumii發(fā)酵液中分離出一種新的苯乙烯吡喃酮類化合物桑黃素LA,該化合物為I.baumii發(fā)酵的主產(chǎn)物,并表現(xiàn)出良好的抗氧化活性。后期成功建立了I.baumii發(fā)酵與桑黃素LA樹脂分離耦合的新工藝,產(chǎn)量提升明顯,分離效果好,為I.baumii后期大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)桑黃素LA提供了新的分離思路,促進了桑黃素LA大規(guī)模生產(chǎn)的工業(yè)化進程。
【學位授予單位】：中國石油大學(華東)
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：TQ920.6;R284.2
【圖文】：

PIP60-1和PISP1的結(jié)構(gòu)

到 OD734n m為 0.3 左右。取稀釋的混合液 800 μ/，加入 200 μ/不同濃度的樣品液混勻，室溫靜置 6 min，酶標儀在測 734 nm的吸光度為 A1�？瞻讓φ諛悠芬簽� A0，A 為不加樣品液的吸光度。按公式 2-5 計算 ABTS＋自由基清除能力。清除率=（1-$1-$0$） 100 2-52.4 結(jié)果分析與討論2.4.1 定性分析結(jié)果許多文獻報道[44,45]桑黃能夠產(chǎn)生多酚類化合物（主要是黃酮類），為了驗證本株 I.baumii 的發(fā)酵液中主要成分是否也為黃酮類物質(zhì)，對發(fā)酵液樣品進行了一系列的顯色反應進而推斷發(fā)酵液中含有的化合物類型及結(jié)構(gòu)。樣品經(jīng)過顯色反應后顏色變化如圖 2-1，反應后熒光顏色如圖 2-2。顯色反應和熒光顏色反應統(tǒng)計如表 2-3，其中+代表對應表的熒光顏色與對照比較增強，-代表對應的熒光顏色與對照比較減弱。

圖 2-2 反應后熒光顏色Fig2-2 Fluorescent color after reaction表 2-3 顯色反應及熒光顏色統(tǒng)計e2-3 Summary of chromogenic reaction and fluorescent反應顏色熒光顏色檸檬黃色 黃綠色棕黃色 黃綠色+ 黃酮醇層土黃色，下層褐色沉淀 藍綠色-- 具鄰二層亮黃色，下層棕色沉淀 微弱熒光 鄰二酚羥基或棕色 黃色++3-OH、4- O

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