【摘要】：目的:研究人參皂苷Rd對(duì)兩種人胃癌SGC-7901和MKN-45細(xì)胞增殖及凋亡的影響,并初步探討其作用機(jī)制。方法:1.采用MTT法,觀察GS-Rd對(duì)于人胃癌細(xì)胞SGC-7901和MKN-45在不同濃度和不同作用時(shí)間下對(duì)其細(xì)胞增殖的影響;2.利用平板克隆法驗(yàn)證人胃癌細(xì)胞在不同濃度GS-Rd的干預(yù)下對(duì)于細(xì)胞集落形成的影響;3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GS-Rd在不同濃度不同時(shí)間段內(nèi)對(duì)于兩種人胃癌細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期的影響;4.Western blot法檢測(cè)GS-Rd對(duì)于人胃癌SGC-7901和MKN-45細(xì)胞系凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9以及周期重要蛋白Cyclin D1的表達(dá)情況。結(jié)果:1.對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901和MKN-45給與濃度為40、80、120、160、200μg/mL的人參皂苷Rd作用不同的時(shí)間(24 h、48 h、72 h)之后發(fā)現(xiàn),人參皂苷Rd在不同濃度不同的時(shí)間段內(nèi)對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901和MKN-45均有抑制作用,且隨著給藥濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)其抑制效果也明顯的增強(qiáng),具有明顯的時(shí)間-劑量依賴(lài)性,48 h的IC_(50)是SGC-7901為86.963±0.230μg/mL,MKN-45為71.698±2.162μg/mL,在72 h時(shí)GS-Rd對(duì)于兩種細(xì)胞的抑制率分別達(dá)到最高;2.利用平板克隆法檢測(cè)GS-Rd對(duì)人胃癌細(xì)胞增殖的影響后發(fā)現(xiàn):Rd對(duì)兩種胃癌細(xì)胞集落的形成均有明顯的抑制作用,與Control組相比,給藥組克隆的體積和數(shù)量隨Rd濃度升高而逐漸減少,具有劑量依賴(lài)性;3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示GS-Rd對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901和MKN-45凋亡具有較明顯的促進(jìn)作用,凋亡以晚凋?yàn)橹?與Control組相比,兩種細(xì)胞的凋亡率均逐漸升高,具有時(shí)間-劑量依賴(lài)性;4.細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示GS-Rd作用于人胃癌細(xì)胞48 h后G0/G1期的比率上升,而S期和M期的比率變化沒(méi)有顯著趨勢(shì)。5.Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達(dá)水平升高、Bcl-2表達(dá)水平下降、Caspase-3和Caspase-9表達(dá)水平都升高,而周期蛋白cyclin D1的表達(dá)水平下降。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:人參皂苷Rd對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901和MKN-45都具有較為明顯的抑制作用,具有顯著的時(shí)間-劑量依賴(lài)性;Rd可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的凋亡,并可能通過(guò)阻滯細(xì)胞周期于G1期來(lái)抑制增殖,其作用機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá),降低凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達(dá),降低Bcl-2/Bax的比率,進(jìn)而調(diào)控下游蛋白分子Caspase家族中Caspase-3的活化,激活凋亡受體Caspase-9的表達(dá),使細(xì)胞發(fā)生凋亡。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【圖文】：

大學(xué)碩士學(xué)位論文 人參皂苷 Rd 對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及分子 平板克隆法分析 GS-Rd 對(duì)人胃癌細(xì)胞 SGC-7901 和 MKN-45 細(xì)胞增殖的平板克隆試驗(yàn)結(jié)果顯示，兩種胃癌細(xì)胞陰性組和給藥組的細(xì)胞克隆形成顯的差異，給藥組的細(xì)胞集落數(shù)明顯要小于陰性組的集落數(shù)，且集落的顯的小于陰性組；在給藥組之間，隨著藥物濃度的增加，其集落的數(shù)量著減少和縮小，呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴(lài)性，如圖 3-3，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組著性差異（P < 0.05），各實(shí)驗(yàn)組之間比較也有顯著性差異（P < 0.05），察到 GS-Rd 對(duì)胃癌 MKN-45 細(xì)胞克隆數(shù)的影響最大，如圖 3-4 和圖 3-5

人參皂苷 Rd 對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的癌細(xì)胞 SGC-7901 和 MKN-45 相關(guān)蛋白表達(dá)的影響C-7901 和 MKN-45 細(xì)胞中 Bcl-2 家族蛋白的影響 3-11，Western Blot 檢測(cè)結(jié)果顯示，和 Control 組相比KN-45 和 SGC-7901 細(xì)胞中 Bax 的相對(duì)表達(dá)量顯著少，Bcl-2/Bax的比率隨Rd濃度的增加而減少如（表6顯著性（P＜0.05），濃度越高顯著性越大。

顯著性（P＜0.05），濃度越高顯著性越大。Rd對(duì)人胃癌細(xì)胞MKN-45中Bax和Bcl-2表達(dá)量的影響（Me：*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01，***P ＜ 0.001

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本文編號(hào)：2791041