【摘要】：苜蓿素(tricin),是黃酮類化合物,又稱麥黃酮、小麥黃素。本課題組前期對(duì)草木樨屬植物白花草木樨植物進(jìn)行活性成分研究,首次發(fā)現(xiàn)苜蓿素對(duì)黃嘌呤氧化酶具有較強(qiáng)的抑制活性,是治療痛風(fēng)的潛在天然產(chǎn)物。關(guān)于苜蓿素活性深入研究和其他藥理功能報(bào)道不多,部分原因在于獲得苜蓿素單體較困難。本課題通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)大量禾本科植物中含有苜蓿素,尤其是原料廉價(jià)易得的小麥秸稈、水稻秸稈等農(nóng)業(yè)生產(chǎn)副產(chǎn)品中含量較高�；诖顺煞�,選取小麥殼、小麥秸稈、水稻殼、水稻秸稈、大麥麩皮、高粱麩皮、早熟禾種子、玉米苞葉6種植物為研究對(duì)象,建立一種HPLC測(cè)定苜蓿素含量的方法。采用單因素考察模式通過(guò)改變提取溶劑、溫度、時(shí)間得到苜蓿素最佳提取工藝,篩選出苜蓿素含量較高的植物資源。通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研,發(fā)現(xiàn)苜蓿素主要以游離苜蓿素苷元和苜蓿素糖苷兩種形式存在于植物中。為進(jìn)一步提高苜蓿素的利用率,本實(shí)驗(yàn)采用酸水解苜蓿素糖苷的方法游離出更多的苜蓿素苷元,通過(guò)對(duì)糖苷酸水解反應(yīng)條件的考察,對(duì)不同酸度、水解溫度和水解時(shí)間的考察,建立了苜蓿素糖苷酸水解的最佳工藝。選取的禾本科中6種植物經(jīng)酸水解反應(yīng)后采用HPLC含量測(cè)定方法檢測(cè)苜蓿素含量,發(fā)現(xiàn)小麥秸稈中苜蓿素高達(dá)1925.05 mg·kg~(-1),比水解前含量高出約一倍,小麥殼、水稻秸稈等酸水解后苜蓿素含量都得到了大幅度提升。采用最佳提取工藝和最佳酸水解工藝對(duì)這6種植物提取和酸水解后測(cè)定苜蓿素含量,確定小麥秸稈是制備苜蓿素的最佳原料。為進(jìn)一步快速高效制備苜蓿素對(duì)照品,本實(shí)驗(yàn)以小麥秸稈為原料建立了D101大孔吸附樹(shù)脂和高速逆流色譜技術(shù)(HSCCC)相結(jié)合的高效快速制備苜蓿素的方法。小麥秸稈用70%甲醇加熱回流提取,提取物經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂柱色譜初步分離,富集目標(biāo)化合物;選用70%乙醇大孔樹(shù)脂洗脫組分采用HSCCC分離純化目標(biāo)化合物,以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(4∶6∶3.5∶6.5,V∶V∶V∶V)為HSCCC溶劑系統(tǒng),上相為固定相,下相為流動(dòng)相制備苜蓿素,HPLC歸一化法檢測(cè)純度質(zhì)譜和核磁共振波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)。經(jīng)過(guò)HSCCC分離后,從200 mg D101大孔吸附樹(shù)脂柱色譜70%乙醇洗脫組分中一次性分離得到苜蓿素32.4 mg,然而傳統(tǒng)方法70%乙醇大孔樹(shù)脂洗脫部位經(jīng)十八烷基鍵合硅膠結(jié)合半制備HPLC分離,200 mg含有苜蓿素組分的樣品經(jīng)半制備HPLC得到苜蓿素14.2 mg。此方法簡(jiǎn)便快捷,耗時(shí)較短制備量大,適于從小麥秸稈中高效快速制備苜蓿素,為含有該成分的中藥材及其制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)提供對(duì)照物質(zhì)。本研究建立了一種HPLC測(cè)定苜蓿素含量的方法,考察禾本科植物不同部分苜蓿素的含量,為含有該成分的中藥材提供了分析依據(jù)。結(jié)合現(xiàn)代分離方法和技術(shù)手段分離制備苜蓿素,為苜蓿素對(duì)照品的批量化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ),填補(bǔ)了制備苜蓿素單體困難這一空白領(lǐng)域,具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.1
【圖文】：

結(jié)果位（Fr2），50%乙醇大孔樹(shù)脂洗脫部位（Fr3），70%乙醇大孔樹(shù)脂洗脫部位（Fr4）。通過(guò)圖譜中結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)苜蓿素主要富集在 50%、70%乙醇大孔樹(shù)脂洗脫部位。50%洗脫部位化合物成分復(fù)雜不易分離制備苜蓿素，選擇 70%乙醇大孔樹(shù)脂洗脫部位進(jìn)一步結(jié)合十八烷基鍵合硅膠和半制備高效液相色譜儀進(jìn)行制備。1.2 苜蓿素制備通過(guò)色譜條件的優(yōu)化最終確定苜蓿素的制備條件是：柱溫 25℃，進(jìn)樣量 60 μL流速 2.8 mL min-1，流動(dòng)相甲醇比水 45∶55，檢測(cè)波長(zhǎng) 350 nm。制備圖譜如 1.3。

小麥殼 50%甲醇 186.08±4.18小麥殼 30%甲醇 5.98±0.95小麥殼 水 ND小麥秸稈 100%甲醇 436.01±10.26小麥秸稈 70%甲醇 605.43±9.02小麥秸稈 50%甲醇 365.91±29.39小麥秸稈 30%甲醇 44.66±8.14小麥秸稈 水 ND水稻秸稈 100%甲醇 244.6353±3.25水稻秸稈 70%甲醇 426.36±1.49水稻秸稈 50%甲醇 249.57±7.57水稻秸稈 30%甲醇 7.40±7.57水稻秸稈 水 ND

圖 1.8 不同提取時(shí)間對(duì)苜蓿素提取量的影響Fig. 1.8 Effect of different excertion time on tricin (n=3).結(jié)果表明，在相同的提取溶劑和溫度下對(duì)小麥殼、小麥秸稈、水稻秸稈分別提取 0.5h，1h，2h 時(shí)苜蓿素提取量相差較大，平行三次提取的樣品 RSD 值較大。懷疑苜蓿素沒(méi)有提取完全，提取時(shí)間延長(zhǎng)至 4 小時(shí)發(fā)現(xiàn)小麥殼和水稻秸稈中苜蓿素提取量在繼續(xù)上升，提取 6 小時(shí)苜蓿素提取量上升幅度縮小。小麥秸稈 6 小時(shí)苜蓿素含量最高比 4 小時(shí)上升幅度較大。70% 甲醇溶劑提取苜蓿素時(shí)為了提取量穩(wěn)定，降低測(cè)定誤差，提高提取效率提取時(shí)間選擇 6 小時(shí)。4.3 苜蓿素苷元提取料液比考察結(jié)果在確定提取溶劑和時(shí)間的情況下繼續(xù)考察料液比對(duì)苜蓿素提取量的影響。選擇70%甲醇水作為提取溶劑，料也液比按照 1:5，1:10，1:15，1:20 進(jìn)行提取 6 小時(shí)。苜蓿素提取量結(jié)果如表 1-6，圖 1.9。

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