【摘要】：姜黃素(Cur)是一種天然的強抗氧化劑,對腫瘤、炎癥、老年癡呆癥等各種惡性疾病具有預防治療作用。但由于姜黃素極差的穩(wěn)定性和水難溶性降低了其在體內的生物利用度,嚴重限制了其在臨床的應用。CB和FE是課題組合成的兩個新型姜黃素類似物,較姜黃素具有更好的抗氧化和抗腫瘤功效,而且生物穩(wěn)定性更佳。目的:利用Caco-2細胞考察Cur、CB和FE的細胞攝取情況,并利用體外Caco-2細胞單層模型研究Cur、CB和FE的腸道轉運過程及轉運機制。方法:首先考察了Cur、CB和FE在Caco-2細胞中的攝取情況。之后建立Caco-2細胞單層模型并對其完整性及緊密性進行評價,用評價合格的模型對Cur、CB和FE進行模擬腸道轉運研究,用HPLC法測定藥物的轉運量并計算Papp值,推測藥物的轉運機制。結果:(1)細胞攝取的實驗結果表明,Cur、CB和FE在Caco-2細胞中的攝取在一定濃度條件下均具有顯著的時間和濃度依賴性。給藥濃度為50μM,攝取時間為2 h時,Caco-2細胞對Cur、CB和FE的攝取量分別為1.60±0.15 nmol/mg protein、4.65±0.23 nmol/mg protein、6.64±0.27 nmol/mg protein;(2)吸收轉運的結果表明,Cur、CB和FE在Caco-2單層細胞模型中的雙向轉運量均隨時間的延長呈升高趨勢,具有顯著的時間依賴性。AP→BL的表觀滲透系數數據表明,相同濃度(25μM)時,CB(3.18±0.31×10~(-6) cm/s)和FE(5.28±0.83×10~(-6)cm/s)在Caco-2細胞單層模型中的吸收轉運都明顯大于Cur(1.13±0.11×10~(-6) cm/s);(3)雙向轉運的P_(app)數據表明,三個化合物的ER值均在1.0-1.5范圍內,提示三者的腸道轉運均沒有明顯的主動外排現象。(4)CB和FE的轉運量具有明顯的濃度依賴性,表明這兩者的轉運機制主要為被動轉運。結論:綜上所述,CB和FE在Caco-2細胞單層模型中的腸道通透性均較Cur本身具有明顯的提高,故這兩者在體內可能表現出更高的生物利用度,在臨床用藥和食品保健品方面表現出更高的應用潛力。
【學位授予單位】：浙江工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285
【圖文】：

圖 1-2 藥物的吸收轉運途徑Figure 1-2 Transport routes of drugs藥物的吸收機制又可分為：① 被動轉運（transcellular passive transport）。生物膜兩側存在濃度差或電位差時，藥物順化學濃度梯度或順電位梯度從一側向另一側遷移的過程。包括以給藥部位與血液中藥物濃度差為擴散動力的單純擴散和直接通過細胞膜上 0.4-0.8 nm 大小微孔的膜孔轉運。此過程不需要載體或能量，也不存在競爭抑制和飽和現象，直到膜兩側濃度達到平衡，轉運即保持動態(tài)平衡② 載體媒介轉運（carrier-mediated transport）。藥物借助生物膜上的化學載體蛋白與藥物結合，并將藥物遷移至膜的另一側，使藥物得到吸收的過程。包括藥物借助載體順濃度梯度遷移的促進擴散和逆濃度梯度遷移的主動轉運。此過程需要載體的參與，具有競爭抑制和飽和現象。③ 膜動轉運（membrane-mobiltransport）。膜動轉運包括攝入過程（胞飲和吞噬）和外排過程（胞吐），是一種通過細胞膜的內陷，形成小胞，將藥物包裹住，轉移到細胞內的過程；或在細胞

5.2.1 細胞單層模型的建立細胞的培養(yǎng)方法參照第三章的 3.2.2。待細胞在培養(yǎng)瓶中達到 80-90% 的融合時，用胰蛋白酶-EDTA（0.02%）將細胞消化下來。將細胞以 2 × 105cell/mL的密度接種到 transwell 培養(yǎng)板上培養(yǎng)（Figure 5-1）。向 transwell 板的 AP 側加入0.5 mL 細胞懸浮液（留兩個孔加入新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基作為空白對照），BL側加入 1.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，將 Transwell 培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第 3 d 換液，先吸去 Transwell 培養(yǎng)板 BL 側的舊培養(yǎng)基，再小心地吸去 Transwell培養(yǎng)板 AP 側的舊培養(yǎng)基，加入適量的 HBSS 緩沖液清洗細胞層和底端，吸去后迅速向每個Transwell 培養(yǎng)板小室的BL側加入 1.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，AP 側加入 0.5 mL 新鮮 DMEM 完全培養(yǎng)基，然后將 Transwell 培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中。第一周，每兩天換一次培養(yǎng)基，之后，每天換培養(yǎng)基直至第 21 d。

.5 mL 和 1.5 mL 的 HBSS 緩沖液，轉移至培養(yǎng)箱 培養(yǎng)板，吸棄 HBSS 緩沖液，再往 AP 側及 BL 側S 緩沖液，再轉移至培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 20 min。測儀表功能，之后打開電阻儀電源開關，將 STT”接口，將儀表模式按至“Ohms”一側，將電極養(yǎng)板的各個孔中（短端浸入培養(yǎng)板 AP 側，長端浸入90°），檢測跨膜電阻值（Figure 5-2），穩(wěn)定后開始，每孔測三次，三組數據的平均值即為該孔的電阻值按式 Equation 5-1 計算： -(cm2 cm) TEER( Ω)TEER(Ω) 面積2樣品孔空白孔ER樣品孔為含有細胞孔的跨膜電阻值；TEER空白孔為所用 Transwell 板的薄膜面積為 1.12 cm2。

【參考文獻】

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本文編號：2779203