【摘要】：目的:本研究以張仲景《傷寒論》中記載的白芍甘草藥對為基礎,應用現(xiàn)代科學技術和手段,對白芍甘草配伍的醇提取物進行研究,通過薄層色譜與指紋圖譜法對其進行鑒別及綜合評價,通過對芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、甘草苷、異甘草苷、甘草酸、異甘草素等指標性成分進行含量測定,建立質(zhì)量標準,從而全面、綜合、有效地評價其質(zhì)量,為完善其質(zhì)量評價體系提供參考;通過對白芍甘草藥對醇提物的血清指紋圖譜及藥代動力學進行研究,考察入血成分,并對相關指標及藥代動力學參數(shù)進行研究,闡述其在體內(nèi)代謝過程,探索其藥效物質(zhì)基礎。從而科學合理的闡明了白芍甘草配伍乙醇提取物為其最佳的極性提取部位,并且為其臨床應用提供了更加科學合理的依據(jù)。材料與方法:1.采用硅膠G板,以三氯甲烷:乙酸乙酯:甲醇:甲酸(40:5:10:0.2),環(huán)己烷:乙酸乙酯:冰醋酸(15:5:0.4),正丁醇:冰醋酸:水(20:3.5:4)為展開劑,以5%的香草醛硫酸溶液,10%的硫酸乙醇溶液為顯色劑,分別對白芍甘草藥對醇提物中的芍藥苷、甘草酸、甘草次酸進行薄層鑒別。2.采用HPLC波長切換法對白芍甘草藥對醇提物的6種指標性成分(芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、甘草苷、異甘草苷、甘草酸、異甘草素)進行含量測定。3.采用HPLC波長切換法,建立白芍甘草藥對醇提物的指紋圖譜。4.采用HPLC波長切換法,對灌胃白芍醇提物、甘草醇提物、白芍甘草藥對醇提物的大鼠進行腹主動脈取血,建立白芍醇提物、甘草醇提物、白芍甘草藥對醇提物的血清指紋圖譜。5.對用己烯雌酚和縮宮素造的原發(fā)性痛經(jīng)模型大鼠,灌胃白芍醇提物、甘草醇提物、白芍甘草藥對醇提物的大鼠進行不同時間點眼底靜脈叢取血,采用HPLC色譜法,同時測定芍藥苷、甘草酸、甘草次酸成分,研究芍藥苷、甘草酸、甘草次酸的藥動學行為。結果:1.白芍甘草醇提物薄層色譜中,在與芍藥苷對照品相應的位置上,顯示相同顏色斑點,陰性液無此斑點。置365 nm紫外燈下觀察,白芍甘草藥對醇提物色譜中與甘草次酸對照品色譜相應位置上有相同橙黃色熒光顏色斑點出現(xiàn),陰性液沒有。置365 nm紫外燈下觀察,白芍甘草藥對醇提物色譜中與甘草酸對照品色譜相應位置上有相同顏色斑點出現(xiàn),陰性液沒有。2.本實驗采用HPLC波長切換法測定6種指標性成分含量,其中芍藥苷含量較高6.904~7.091 mg/g,異甘草素含量稍低0.2494~0.2568 mg/g,該方法穩(wěn)定可行,能夠使各指標性成分均在最大吸收處被檢測。3.建立了白芍甘草藥對醇提物的指紋圖譜,取9個不同批次的白芍甘草藥對醇提物,依據(jù)指紋圖譜的整體性和特征性,共標定了22個共有峰,其中9個峰來自白芍,15個峰來自甘草,有2個共有峰,結果顯示,白芍甘草藥對醇提物的指紋圖譜,有效成分的峰面積較大,而其它成分峰面積非常小。4.采用HPLC波長切換法建立白芍甘草藥對醇提物的血清指紋圖譜,在白芍甘草醇提物的含藥血清里共檢測出16個成分,其中14個峰來自甘草,8個峰來自白芍,6個共有峰,可以確定的成分有5個,通過對比對照品,這5個原型成分分別是芍藥內(nèi)酯苷,芍藥苷,甘草苷,甘草酸,甘草次酸。同樣色譜條件下,其中有6個峰在白芍甘草醇提物的體外供試品溶液沒有檢出(或低于檢出限),推測這6個成分可能為代謝產(chǎn)物。5.單獨灌胃白芍醇提物時Tmax為0.5 h,灌胃白芍甘草藥對醇提物時Tmax為0.625±0.21 h,單獨灌胃白芍醇提物時AUC0-t為9.239±0.47,Cmax為3.044±0.37,灌胃白芍甘草藥對醇提物時AUC0-t為7.751±0.52,Cmax為2.609±0.14,單獨灌胃白芍醇提物時T1/2為20.83±8.34 h,灌胃白芍甘草藥對醇提物時T1/2為18.71±5.43 h,單獨灌胃甘草醇提物時甘草酸的Tmax為4 h,灌胃白芍甘草藥對醇提物時Tmax為1 h,單獨灌胃甘草醇提物時甘草酸的AUC0-t為19.27±0.87,Cmax為2.665±0.23,T1/2為4.704±2.59 h,灌胃白芍甘草藥對醇提物時甘草酸的AUC0-t為11.72±0.60,Cmax為3.295±0.42,T1/2為20.56±13.92 h,單獨灌胃甘草醇提物時甘草次酸的AUC0-t為27.82±0.68,Cmax為2.628±0.26,T1/2為8.873±1.02 h,灌胃白芍甘草藥對醇提物時甘草次酸的AUC0-t為31.56±1.36,Cmax為3.064±0.24,T1/2為5.347±0.36 h。結論:通過對白芍甘草藥對醇提物科學的研究,建立了白芍甘草藥對醇提物的質(zhì)量標準,探討了白芍甘草藥對醇提物的藥代動力學行為,從而使對白芍甘草藥對醇提物的研究達到科學、準確、完善。為白芍甘草藥對醇提物的配伍機制及藥效物質(zhì)基礎研究作出了積極的探索。
【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R284
【圖文】：

05 mg 加甲醇定容至 25 ml液。醇 10 ml，振搖 5 min，過國藥典 2015 通則 0502）分l、2 ul 點于硅膠 G 薄層板，展開劑，展至 12 cm 左右醇提物的薄層色譜中，在點，陰性液無此斑點。

加甲醇定容至 25 液。粉末 0.5 g，置具塞錐形瓶中濾過，濾液蒸干，加 1.5 m吸取供試品溶液，對照品溶環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（乙醇溶液，105℃加熱 5 m 紫外燈下觀察，白芍甘草置上有相同橙黃色熒光顏色

粉末 0.5 g，加 40 ml 乙醚置30 ml 甲醇超聲處理 30 min20 ml 正丁醇溶液提取 3 次解。吸取供試品溶液，對照品溶正丁醇：冰醋酸：水 （20:3溶液，105℃加熱 5 min。 紫外燈下觀察，白芍甘草上有相同顏色斑點出現(xiàn)，陰

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本文編號：2778534