【摘要】：研究目的:觀察燈盞益腎顆粒(原“云南燈盞花膠囊”)對(duì)糖尿病腎病大鼠TGF-Smad轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,從分子和蛋白水平探討燈盞益腎顆粒對(duì)糖尿病腎病可能的作用靶點(diǎn)和機(jī)制,為臨床用藥治療糖尿病腎病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法:1、動(dòng)物分組:清潔健康的成年雄性SD大鼠90只,體重(230±20)g,8周齡。將90只大鼠隨機(jī)分正常組15只(A組)和鏈脲佐菌素模型組75只。將造模成功后的大鼠隨機(jī)分成模型組(B組)、鹽酸貝那普利組(C組)、燈盞益腎低劑量組(D組)、燈盞益腎中劑量組(E組)和燈盞益腎高劑量組(F組)各15只。2、模型制備:B組、C組、D組、E組和F組使用1%檸檬酸鹽緩沖液溶解鏈脲佐菌素(STZ,Streptozotocin),按55mg/kg一次性在大鼠左側(cè)腹腔注射,A組用等量生理鹽水腹腔注射。造模處理72小時(shí)后連續(xù)3天尾靜脈測(cè)血糖值≥16.7mmol/L為糖尿病模型制備成功。糖尿病模型大鼠喂養(yǎng)1周后隨機(jī)血糖≥16.7mmol/L、尿量大于對(duì)照組50%、尿糖呈強(qiáng)陽性、24h尿白蛋白大于對(duì)照組50%為糖尿病腎病模型制備成功。3、分組給藥:A組、B組均予生理鹽水10ml/(kg.d),灌胃;C組予鹽酸貝那普利1.05mg/(kg.d),灌胃;D組、E組、F組:分別予燈盞益腎顆粒1.89g/(kg.d)、9.45g/(kg.d)、18.9g/(kg.d),灌胃,連續(xù)灌胃6周。4、指標(biāo)觀察:各組大鼠每周稱重一次;于灌胃第6周末處死大鼠的前一天取各組大鼠尿液待檢;第2天,稱體重,腹主動(dòng)脈取血,離心待檢。用全自動(dòng)多功能生化儀檢測(cè)胱抑素C(Cystatin C Cys C)、血肌酐(Serum Creatinine Scr)、血尿素氮(Blood uria nitrogen BUN)、尿蛋白/尿肌酐(Urine protein/Urine creatinine Up/Ucr)等生化指標(biāo);取腎臟,稱重,運(yùn)用免疫組化法測(cè)定大鼠腎組織TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型膠原、纖維連接蛋白的表達(dá)情況。采用美國(guó)MediaCybernetics公司生產(chǎn)的Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析。任選5個(gè)視野,檢測(cè)腎組織TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型膠原、FN陽性著色的陽性率,分別取其平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。5、結(jié)果:5.1、生化指標(biāo)檢測(cè):(1)空腹血糖、腎系數(shù)(腎重/體重)、尿蛋白/尿肌酐(Up/Ucr)、胱抑素C、尿素氮,A組和B組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(2)腎系數(shù)、Up/Ucr、Cys C:與B組相比,C組、D組Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05),E組、F組明顯降低(P0.01);與C組相比,E組、F組Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05);與D組相比,E組、F組Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05)。(3)BUN:與B組相比,C組、D組、F組BUN含量降低(P0.05),E組明顯降低(P0.01);與C組相比,E組BUN含量降低(P0.05);E組BUN含量比D組降低(P0.05)。與E組相比,F組BUN含量增多(P0.05)。(4)Scr:各組之間兩兩比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.2、免疫組化TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型膠原、FN檢測(cè):(1)A組和B組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與B組相比,C組、D組腎組織TGF-β1、Smad2、Ⅳ型膠原、FN蛋白表達(dá)降低(P0.05);E組、F組明顯降低(P0.01);與C組相比,E組、F組腎組織TGF-β1、Smad2、Ⅳ型膠原、FN蛋白表達(dá)降低(P0.05)。(2)Smad7:A組和B組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。與B組相比,C組、D組腎組織Smad7蛋白表達(dá)增多(P0.05),E組、F組明顯增多(P0.01);與C組相比,E組、F組腎組織Smad7蛋白表達(dá)增多(P0.05)。結(jié)論:燈盞益腎顆粒和鹽酸貝那普利都可改善DN大鼠的基本狀況;兩者均可減輕尿微量白蛋白排泄和腎損傷。燈盞益腎顆粒3個(gè)劑量組中,中劑量組和高劑量組效果較優(yōu),燈盞益腎顆粒中高劑量組優(yōu)于鹽酸貝那普利組;免疫組化結(jié)果分析顯示,燈盞益腎顆粒和鹽酸貝那普利均可抑制TGF-Smad信號(hào)通路激活,減輕腎組織纖維化表達(dá)。燈盞益腎顆粒中、高劑量組效應(yīng)優(yōu)于低劑量組和鹽酸貝那普利組;上述治療作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系趨勢(shì)。
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 高燕;袁魯亮;張海松;;β-酪啡肽7對(duì)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病腎病模型大鼠的腎保護(hù)[J];中國(guó)組織工程研究;2016年05期

2 劉圣;陳象青;唐麗琴;余娜;張小力;杜紅芳;;復(fù)方黃連膠囊對(duì)早期糖尿病腎病大鼠腎組織TGF-β1/BMP-7表達(dá)失衡及其Smad信號(hào)通路的調(diào)控作用[J];中國(guó)中藥雜志;2015年05期

3 胡勤錦;閆振成;;尿毒清聯(lián)合ARB/ACEI治療糖尿病腎病大量蛋白尿的療效觀察[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年26期

4 杜義斌;李琦;張坤揚(yáng);段艷蕊;吳曉;謝楚僑;劉明星;潘承政;;云南燈盞花膠囊對(duì)慢性腎衰竭大鼠CTGF及Smad 7mRNA表達(dá)影響的研究[J];環(huán)球中醫(yī)藥;2014年09期

5 王秀閣;趙金祥;樸春麗;陳曦;高林花;;解毒通絡(luò)保腎膠囊對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織中Col Ⅳ及FN表達(dá)的影響[J];長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年04期

6 杜義斌;吳曉;吳鋒;李琦;張坤揚(yáng);段艷蕊;謝楚僑;何立群;;云南燈盞花膠囊對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠TGF-β_1與PAI-1 mRNA表達(dá)及腎功能的影響[J];上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年04期

7 王彥江;謝席勝;馮勝剛;龍瓊先;艾娜;王寶福;;STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠造模法中大鼠死亡原因探討[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年04期

8 張蓮蓮;陳吉田;韓在剛;;注射用燈盞花素聯(lián)合厄貝沙坦片治療早期糖尿病腎病療效觀察[J];中國(guó)民康醫(yī)學(xué);2014年10期

9 張麗芬;呂仁和;黃文政;;鏈脲佐菌素糖尿病腎病大鼠模型的建立及穩(wěn)定性評(píng)價(jià)[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2014年04期

10 侯燕琳;趙怡蕊;趙建平;;芪術(shù)膠囊對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織TGF-β1和CTGF表達(dá)的影響[J];世界中西醫(yī)結(jié)合雜志;2013年11期

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