【摘要】：隨著當(dāng)代醫(yī)療技術(shù)的飛速發(fā)展,人們對(duì)耳部相關(guān)的疾病有了越來越深入的研究,因此防治毛細(xì)胞損傷的研究正迎來一個(gè)新的春天。目前治療耳聾的方法有使用藥物治療,基因治療,干細(xì)胞療法等。我國(guó)天然藥物資源蘊(yùn)藏豐富,中藥是眾多藥物庫(kù)中的一個(gè)重要構(gòu)成,它在防治藥源性耳聾方面的研究也日漸增加�；诩{米制劑可以提高或改善藥物的生物利用度,因此在近幾年引起了研究者們的關(guān)注。在現(xiàn)代的臨床用藥中已表明氨基糖苷類是非常有效的抗菌劑;順鉑是一種化學(xué)治療劑,常用于治療癌癥(如肺癌,前列腺癌等),但眾所周知的是,它們的使用會(huì)引起耳毒性,極大地影響病人的生活質(zhì)量。因此,在能夠保持順鉑或慶大霉素藥效的同時(shí),降低它們的耳毒性是目前研究人員面臨的重大挑戰(zhàn),本研究對(duì)細(xì)胞和斑馬魚分別進(jìn)行慶大霉素,順鉑的造模,從224種中藥提取物中篩選出有效的組分,并初步構(gòu)建其納米制劑,為進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)能夠預(yù)防耳毒性藥物及制劑的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。本研究以小鼠耳蝸毛細(xì)胞系HEI-OC1細(xì)胞為模型,經(jīng)過實(shí)驗(yàn)考察,利用慶大霉素或順鉑造模條件分別為10 mM和40μM作用細(xì)胞24 h,并且選擇40μM EDA作為慶大霉素造模的陽(yáng)性藥,1 mM NAC作為順鉑造模時(shí)的陽(yáng)性藥。篩選了224種中藥提取物,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了有13種中藥提取物既有慶大霉素,又有由順鉑誘導(dǎo)的HEI-OC1細(xì)胞損傷的預(yù)防作用,使用有效提取物進(jìn)行預(yù)孵育后,細(xì)胞存活率有明顯提高。以野生型AB系斑馬魚幼魚為模型,經(jīng)過實(shí)驗(yàn)考察,利用慶大霉素和順鉑造模條件分別為100μM和1 mM分別作用細(xì)胞1 h和4 h,并且選擇80μg/mL EDA作為慶大霉素造模的陽(yáng)性藥,40μg/mL NAC作為順鉑造模時(shí)的陽(yáng)性藥。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有2種中藥提取物既有慶大霉素,又有順鉑誘導(dǎo)的毛細(xì)胞損傷的預(yù)防作用,使用有效提取物進(jìn)行預(yù)孵育后,斑馬魚神經(jīng)丘的毛細(xì)胞損傷程度有明顯降低。進(jìn)一步探討了篩選出來的有效提取物是否會(huì)影響慶大霉素的抑菌療效和順鉑的抗肺癌活性,以及是否會(huì)促進(jìn)毛細(xì)胞的再生。采用MTT法測(cè)定非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的存活率,紙片法測(cè)定慶大霉素的抑菌療效,Brdu標(biāo)記法考察斑馬魚毛細(xì)胞的再生情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn),13種有效提取物既不會(huì)影響順鉑的抗癌作用,也不會(huì)影響慶大霉素的抑菌療效,并且有效提取物對(duì)毛細(xì)胞預(yù)防作用的機(jī)制是使毛細(xì)胞免受到慶大霉素的損害,而不是促進(jìn)毛細(xì)胞的快速再生。最后,初步研究制備包載有效提取物的殼聚糖納米粒,并考察了包載尼羅紅的殼聚糖納米粒在斑馬魚幼魚中的攝取情況,斑馬魚攝取試驗(yàn)表明在裝載尼羅紅的殼聚糖納米粒與幼魚作用1小時(shí)后,可明顯看到納米粒能夠被斑馬魚大量攝取,藥效實(shí)驗(yàn)表明包載有效提取物殼聚糖納米粒對(duì)慶大霉素或順鉑誘導(dǎo)的HEI-OC1細(xì)胞和斑馬魚損傷均具有預(yù)防作用。綜上所述,本研究結(jié)果表明,以慶大霉素或順鉑所致的HEI-OC1細(xì)胞和斑馬魚幼魚毛細(xì)胞損傷模型,將有望成為新型大規(guī)模篩選出預(yù)防耳毒性藥物的平臺(tái)。篩選出來的兩種提取物對(duì)慶大霉素或順鉑所致的耳毒性具有預(yù)防和治療作用,并且包載有效提取物的殼聚糖納米制劑在防治耳聾領(lǐng)域具有一定的潛在應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284;R283.6
【圖文】：

學(xué)差異（P<0.001），因此選擇的造模條件分別為 10 mM 慶大霉素或 40 μM 的順鉑孵育 24 h。圖2-1 慶大霉素（A）和順鉑（B）對(duì)HEI-OC1細(xì)胞毒性Fig. 2-1 Cytotoxicity of gentamicin (A), CDDP (B) when incubated with HEI-OC1 Cells asdetermined by MTT assay. *P < 0.05, **P <0.01, ***P <0.001 vs. control group. Results wereshown as mean±SD (n = 6) .2.3.2 陽(yáng)性藥的考察使用不同濃度的 EDA（0，5，10，20，40，80 μM）作用 24 小時(shí)后，采用MTT 法測(cè)出其對(duì) HEI-OC1 細(xì)胞的毒性，發(fā)現(xiàn)在 0-80 μM 濃度范圍內(nèi)的 EDA（EDA）對(duì) HEI-OC1 細(xì)胞的存活率無影響

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文用不同濃度的 EDA（0，10，20，40μM）預(yù)處理 HEI-OC1 細(xì)胞 1 小時(shí)后終濃度為 10 mM 的慶大霉素繼續(xù)孵育 24 小時(shí)，結(jié)果顯示加 20，40 與未加的相比，細(xì)胞存活率顯著性增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明 EDA素引起的 HEI-OC1 細(xì)胞損傷具有預(yù)防作用，見圖 2-2C。先用不同濃度0，0.5，1 mM）預(yù)處理 HEI-OC1 細(xì)胞 1 小時(shí)后，再加入終濃度為 40 繼續(xù)孵育 24 小時(shí)，發(fā)現(xiàn)加入 0.5，1mMEDA 的與未加的相比，細(xì)胞存性增加，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明 NAC 對(duì)順鉑引起的 HEI-OC1 細(xì)胞損傷作用，見圖 2-2D。當(dāng) EDA 和 NAC 的濃度分別大于 40 μM 和 1 mM 時(shí)始死亡，因此選擇 EDA（作為慶大霉素造模的陽(yáng)性藥）和 NAC（作為時(shí)的陽(yáng)性藥）的最佳保護(hù)濃度分別為 40 μM 和 1 mM。

結(jié)果也提示如此。給藥組與正常對(duì)照組相比，慶大霉素的濃度為 100 μM 時(shí),毛細(xì)胞數(shù)量下降約為正常對(duì)照組的 50%，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.001）。圖3-1 慶大霉素?fù)p傷5 dpf的斑馬魚側(cè)線毛細(xì)胞DASPEI染色(A)及計(jì)數(shù)(B), *P < 0.05, **P<0.01,***P <0.001 vs. 對(duì)照組。Fig. 3-1 DASPEI staining (A) and counting (B) of hair cells in zebrafish lateral lineafter gentamicin injury. *P < 0.05, **P <0.01, ***P <0.001 vs. control group.

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10 駐京記者 李雪墨;中藥提取物實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

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1 蘇興業(yè);生物指紋譜分析方法研究中藥提取物和DNA的相互作用[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（大連化學(xué)物理研究所）;2006年

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本文編號(hào)：2771878