【摘要】：目的探討青蒿素對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮層細(xì)胞(ARPE-19)氧化應(yīng)激損傷的抑制作用。方法將ARPE-19細(xì)胞接種于96孔板,每孔7×10~3個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞貼壁后分別加入不同濃度青蒿素,每組濃度做5個(gè)平行復(fù)孔,篩選對(duì)細(xì)胞增殖有效的最佳藥物濃度。將APRE-19細(xì)胞分成四組,對(duì)照組:不做特殊處理;過(guò)氧化氫組:應(yīng)用終濃度為100μmol/L的過(guò)氧化氫處理細(xì)胞24 h;青蒿素組:應(yīng)用青蒿素30μmol/L,處理細(xì)胞24 h;青蒿素預(yù)保護(hù)組:應(yīng)用30μmol/L青蒿素處理細(xì)胞24 h后加入終濃度為100μmol/L的過(guò)氧化氫處理24 h。利用MTT法檢測(cè)青蒿素對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞損傷后的細(xì)胞增殖率;檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)含量和活性氧(ROS)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù);通過(guò)Hoechst33342染色法及JC-1檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位觀測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況;Western Blot法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)凋亡標(biāo)志蛋白Caspase-3、PARP及Bcl-2相對(duì)表達(dá)量;檢測(cè)抗氧化應(yīng)激通路Nrf2/HO-1/Keap1中Nrf2、HO-1、Keap1蛋白相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果1、MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)青蒿素濃度在30μmol/L對(duì)ARPE-19細(xì)胞增殖作用最強(qiáng)(均為P0.01)。青蒿素預(yù)保護(hù)組與過(guò)氧化氫組相比,細(xì)胞增殖率升高,凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。2、青蒿素組ARPE-19細(xì)胞SOD含量顯著增加(P0.05);與過(guò)氧化氫組相比,青蒿素預(yù)保護(hù)組細(xì)胞內(nèi)SOD含量明顯增高(P0.05),說(shuō)明青蒿素能增加細(xì)胞內(nèi)抗氧化物質(zhì),減少細(xì)胞凋亡。與對(duì)照組相比青蒿素組ROS陽(yáng)性細(xì)胞減少(P0.05);與過(guò)氧化氫組相比,青蒿素預(yù)保護(hù)組ROS陽(yáng)性細(xì)胞亦明顯減少(P0.05),說(shuō)明青蒿素可減少過(guò)氧化氫誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)積聚。3、Hoechst33342染色中,青蒿素預(yù)保護(hù)組與過(guò)氧化氫組相比ARPE-19細(xì)胞凋亡數(shù)量減少;JC-1法檢測(cè)線粒體膜電位,熒光染色顯示青蒿素預(yù)保護(hù)組與過(guò)氧化氫組相比綠色熒光減少,紅色熒光增多,說(shuō)明青蒿素減少細(xì)胞線粒體膜電位的缺失,使凋亡細(xì)胞數(shù)減少。Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),青蒿素能促進(jìn)ARPE-19細(xì)胞內(nèi)AKT的磷酸化表達(dá),青蒿素預(yù)保護(hù)組與過(guò)氧化氫組相比細(xì)胞內(nèi)活化的Caspase-3、PARP表達(dá)量降低,Bcl-2表達(dá)增高。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)4、Western Blot檢測(cè)抗氧化應(yīng)激通路Nrf2/HO-1/Keap1,青蒿素預(yù)保護(hù)組與過(guò)氧化氫組相比ARPE-19細(xì)胞內(nèi)Nrf2、HO-1相對(duì)表達(dá)升高,Keap1相對(duì)表達(dá)降低。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1、青蒿素能促進(jìn)ARPE-19細(xì)胞增殖,增加ARPE-19細(xì)胞內(nèi)抗氧化物酶SOD的含量,減少氧化應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)聚集,從而減少過(guò)氧化氫誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞凋亡。2、青蒿素可以降低Caspase-3、PARP的表達(dá),減少過(guò)氧化氫誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞凋亡;促進(jìn)抗氧化應(yīng)激Nrf2/HO-1/Keap1通路中抗氧化應(yīng)激分子Nrf2及其下游靶分子HO-1表達(dá),抑制過(guò)氧化氫誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

或 GAPDH 作為內(nèi)參照。實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3 次后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)學(xué)處理PSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用示，兩兩比較采用 t 檢驗(yàn)，使用單因素方差分析進(jìn)行多組間比較，認(rèn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié) 果蒿素對(duì) ARPE-19 細(xì)胞增殖的影響 法檢測(cè)不同濃度青蒿素對(duì) ARPE-19 細(xì)胞增殖率的影響，結(jié)果顯50 μmol/L 濃度之間對(duì)細(xì)胞均具有增殖作用，青蒿素濃度為 30 增殖作用最強(qiáng) (均為 P<0.01)，見(jiàn)圖 1。MTT 實(shí)驗(yàn)中青蒿素預(yù)保組相比細(xì)胞增值率明顯增加(P<0.05，F(xiàn)=24.41)，見(jiàn)圖 2。

圖 2 MTT 法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖率( x±s )：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與過(guò)氧化氫組相比，#P<0.05,F=24.41 青蒿素對(duì) ARPE-19 細(xì)胞內(nèi) SOD 含量的影響結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，青蒿素組 ARPE-19 細(xì)胞中 SOD 含05)；與過(guò)氧化氫組相比，青蒿素預(yù)保護(hù)組細(xì)胞內(nèi) SOD 含量明05)，見(jiàn)圖 3。說(shuō)明青蒿素可以增加細(xì)胞內(nèi)抗氧化物酶的含量，從-19 細(xì)胞抗氧化應(yīng)激能力。

圖 3 各組細(xì)胞內(nèi) SOD 含量( x±s )：與對(duì)照組相比，*P<0.05, 與過(guò)氧化氫組相比,#P<0.05，F(xiàn)=46.23 青蒿素對(duì) ARPE-19 細(xì)胞內(nèi) ROS 的影響C-FHDA 熒光探針結(jié)合細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)使細(xì)胞產(chǎn)生高強(qiáng)度綠色熒和數(shù)量反應(yīng)各組 ROS 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目多少。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比S 陽(yáng)性細(xì)胞減少(P<0.05)；與過(guò)氧化氫組相比，青蒿素預(yù)保護(hù)組 RO明顯減少(P<0.05)，見(jiàn)圖 4、5。說(shuō)明青蒿素保護(hù) ARPE-19 細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷產(chǎn)生的活性氧自由基的積聚。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 曹紅衛(wèi);郭毅斌;魏利召;王寧;曲海;鄭江;;青蒿素對(duì)膿毒癥大鼠肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的影響[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2006年08期

2 曹紅衛(wèi),郭毅斌,王寧,魏利召,王俊,周紅,鄭江;青蒿素對(duì)膿毒癥大鼠的保護(hù)作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年17期

本文編號(hào)：2771165