【摘要】：【目的】以中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ),運(yùn)用生藥學(xué)鑒定方法對藥典所載陳皮進(jìn)行性狀比較研究,通過薄層鑒別建立四種陳皮的薄層鑒定方法,通過建立陳皮有效成分的含量測定方法及結(jié)合藥理藥效實(shí)驗(yàn),以及通過GC-MS對四種陳皮揮發(fā)油進(jìn)行測定及結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)進(jìn)行比較研究,對藥典四種陳皮進(jìn)行比較研究,以期為找尋廣陳皮有效替代品提供參考和為開發(fā)陳皮臨床應(yīng)用以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)�！痉椒ā�1、運(yùn)用生藥學(xué)鑒定方法,對藥典所載四個(gè)品種陳皮進(jìn)行性狀鑒別和顯微鑒定,分析四個(gè)品種陳皮性狀和顯微差異。2、通過藥典所載對陳皮、枳殼和化橘紅等柑橘屬的薄層鑒定方法,分別對上述三種藥材進(jìn)行薄層鑒定,使用聚酰胺薄膜層析方法對三種中藥材的薄層進(jìn)行檢識,比較兩種方法。3、建立陳皮中主要活性成分的HPLC含量測定方法,并結(jié)合正常小鼠小腸推進(jìn)和止咳祛痰實(shí)驗(yàn),分析比較藥典所載四種陳皮的差異。4、運(yùn)用現(xiàn)代提取分析技術(shù),提取藥典所載四種陳皮中的揮發(fā)油,通過GC-MS分析,分析不同陳皮間揮發(fā)油中的成分的差異性。5、以藥典所載四大陳皮中的揮發(fā)油為供試品,對兔離體小腸平滑肌的影響,以找尋與陳皮功能主治相吻合的活性成分,探討其對兔離體小腸平滑肌的量效曲線關(guān)系,并初步探討其藥效作用機(jī)制�！窘Y(jié)果】1、在性狀鑒別方面,可以通過果皮厚度、氣味差異以及對光透視的油室大小和密集程度對其進(jìn)行區(qū)分,而其他方面的特征對陳皮品種的鑒別也起到一定的輔助作用;在顯微鑒定方面,可以通過橙皮苷結(jié)晶和草酸鈣結(jié)晶形態(tài)和數(shù)量進(jìn)行區(qū)分。2、照2015版《中華人民共和國藥典》第四部:薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn),藥典所載薄層方法無法將三種藥材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷完全區(qū)分,聚酰胺薄膜層析法可同時(shí)鑒別三種藥材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。3、建立了陳皮主要活性成分含量測定的方法,并對藥典所載四個(gè)品種來源陳皮中的橙皮苷、川陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素進(jìn)行了含量測定。結(jié)合正常小鼠小腸推進(jìn)和止咳祛痰實(shí)驗(yàn),大紅袍、茶枝柑、溫州蜜柑和福橘水煎液均對小鼠小腸推進(jìn)有促進(jìn)作用,且均具有一定的止咳祛痰的作用。其中大紅袍和茶枝柑中橙皮素、川陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素的含量相近,但茶枝柑的小腸推進(jìn)的促進(jìn)作用最為顯著且止咳祛痰效果最佳。4、陳皮揮發(fā)油的提取作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,大紅袍的揮發(fā)油得率為3.47%,茶枝柑的揮發(fā)油得率為4.54%,溫州蜜柑的揮發(fā)油得率為3.57%,福橘的揮發(fā)油得率為6.14%;通過GC-MS得到江西新干產(chǎn)大紅袍陳皮樣品揮發(fā)油的總離子流圖,發(fā)現(xiàn)藥典所載四種陳皮均含有α-蒎烯、檜烯、β-蒎烯、β-月桂烯、α-萜品烯、D-檸檬烯、g-萜品烯、萜品油烯、香茅醛、b-欖香烯、(Z)-石竹烯、大根香葉烯、g-欖香烯等13種共有成分。通過使用past軟件對GC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析和聚類分析大致可將陳皮分為廣東新會(huì)茶枝柑樣品與其它地區(qū)樣品兩類。5、藥理試驗(yàn)不同濃度的揮發(fā)油對不同部位離體小腸平滑肌大體都有一定的舒張作用,其中終濃度為1×10~-55 mL/mL陳皮揮發(fā)油對離體小腸的舒張作用最為明顯,可以該濃度作為離體小腸的最大抑制濃度;相比較其他兩種陳皮而言,福橘與蜜柑揮發(fā)油對十二指腸的抑制作用較為顯著,且具有成一定量效關(guān)系(*P0.05,**P0.01)。乙酰膽堿能使離體兔腸肌痙攣,且乙酰膽堿對兔離體腸肌的最大致痙攣終濃度為5.0×10-7 mol/L(即給藥濃度1.0×10-3mol/L,10μL);磷酸組胺能使離體兔腸肌痙攣,磷酸組胺對兔離體腸肌的最大致痙攣濃度為1.5×10-5 mol/L(即1.5×10-2mol/L,20μL);陳皮揮發(fā)油能有效抑制乙酰膽堿、磷酸組胺所導(dǎo)致的小腸痙攣�！窘Y(jié)論】1、可以通過性狀鑒別和顯微鑒定的方法,比較藥典所載四種陳皮的性狀和顯微特征,初步對藥典所載四種陳皮進(jìn)行區(qū)分鑒別。2、照2015版《中華人民共和國藥典》第四部:薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn),藥典所載薄層方法無法將三種藥材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷完全區(qū)分,聚酰胺薄膜層析法可同時(shí)鑒別三種藥材中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。以氯仿-甲醇-丙酮=15:3.5:1.5為展開劑,10%三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑,對陳皮、枳殼和化橘紅提取物中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷等黃酮苷類成分進(jìn)行聚酰胺薄膜層析定性鑒別效果較好,且分離效果良好,斑點(diǎn)圓潤。表明該方法簡便、快捷、清晰、準(zhǔn)確可靠,專屬性強(qiáng),通用性好,可作為枳殼、陳皮和化橘紅中的橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷的定性鑒別。3、通過建立陳皮有效成分的含量測定方法,結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn),對藥典所載四種陳皮進(jìn)行比較研究,找出與廣陳皮相近的其他品種陳皮。4、通過使用past軟件對GC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析和聚類分析大致可將陳皮分為廣東新會(huì)茶枝柑樣品與其它地區(qū)樣品兩類,可用于新會(huì)陳皮和其它不同品種來源陳皮的鑒別。5、陳皮揮發(fā)油能夠抑制乙酰膽堿與磷酸組胺所造成的離體腸痙攣,表明了陳皮揮發(fā)油對胃腸道抑制作用可能是通過影響神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿、組胺的分泌來抑制胃腸蠕動(dòng)或是直接作用于胃腸平滑肌來減少胃腸運(yùn)動(dòng)頻率的。
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1
【圖文】：

α-蒎烯（α-Pinene） γ-松油烯（γ- terpinene）圖 2 陳皮揮發(fā)油中四種主要成分Figure 2 Four main components in the volatile oil of dried tan2.2 黃酮類黃酮類化合物是陳皮的一大類生理活性成分，包括黃酮苷類和苷類主要為橙皮苷（hesperidin）、新橙皮苷（neohesperidin）、柚皮皮苷（narirutin）等。皮達(dá)等[13]對陳皮的黃酮苷類成分進(jìn)行了薄層有橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷。以上四種黃酮苷類化合物的結(jié)構(gòu)OOOH OOOHOOHHH2CCH3OHOOH3OOOOHOHOHOOCH3OHOH HO

陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素）含量測定方法，并結(jié)合現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)（小腸推進(jìn)試驗(yàn)、止咳化痰實(shí)驗(yàn)），最后通過 GC-MS 分析比較四者揮發(fā)油的含量，結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)（兔離體腸實(shí)驗(yàn)），從活性成分（橙皮苷、川陳皮素、七甲氧基黃酮和橘皮素）及揮發(fā)油含量差異，藥理作用的差異方面，開展四大陳皮的比較研究，找尋與廣陳皮成分療效相近的陳皮樣品，為開發(fā)陳皮的臨床應(yīng)用和建立其客觀評價(jià)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。技術(shù)路線圖如圖 1。

15圖 7 四種陳皮的性狀鑒定圖Figure 7 Character identification of four tangerine peels（1：大紅袍；2：茶枝柑；3：溫州蜜柑；4：福橘）表 4 四種陳皮性狀特征表Tab 4 Identification and Contrast Results of Four Peel Characters of Citrus tangerine

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