【摘要】：目的:本研究以冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)——?jiǎng)用}壁脂質(zhì)沉積及細(xì)胞的異常增殖為切入點(diǎn),通過(guò)冠心清化散在防治兔動(dòng)脈粥樣硬化作用研究,探討其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制,為“瘀能化水”理論提供可靠地實(shí)驗(yàn)證據(jù)。方法:1、動(dòng)脈粥樣硬化家兔模型建立與評(píng)價(jià):16只普通級(jí)純種雄性新西蘭家兔,適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后,隨機(jī)分為空白組(8只)及模型組(8只),繼空白組給予普通飼料喂養(yǎng);模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)+免疫損傷以制備實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化模型。連續(xù)喂養(yǎng)10周。檢測(cè)血清總膽固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平;觀察主動(dòng)脈弓整體油紅O染色結(jié)果,以此判定造模成功與否。2、冠心清化散對(duì)動(dòng)脈硬化家兔血脂及斑塊的影響:60只普通級(jí)純種雄性新西蘭家兔,適應(yīng)性飼養(yǎng)2周后,隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性藥物組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組,各10只。除空白組外,其余組給予高脂飼料喂養(yǎng)+免疫損傷制備實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化模型。同時(shí)中藥低、中、高劑量組分別以6.7g/kg/d、13.4g/kg/d、26.8g/kg/d,予冠心清化散懸液灌胃;陽(yáng)性藥物組予辛伐他汀懸液灌胃3mg/kg/d灌胃,連續(xù)灌胃觀察12周。檢測(cè)TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;觀察主動(dòng)脈弓整體油紅O染色結(jié)果。3、冠心清化散抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)理研究采用雙抗夾心ELISA酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清超氧化物歧化酶活性(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)。采用Western blot法檢測(cè)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(Nox4)、氧化酶p22phox蛋白、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ABCA1)、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1(ABCG1)、B族I型清道夫受體(SR-B1)、CD36表達(dá)。采用RT-PCR法檢測(cè)Nox4、p22phox蛋白、PPARγ、ABCA1、ABCG1、SR-B1、caveolin-1 mRNA表達(dá)。4、冠心清化散對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用采用Western blot方法檢測(cè)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)與細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular regulated kinase1/2,ERK1/2)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(Fibroblast growth factor receptors 1,FGFR1)、p21ras蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1、采用高脂飼養(yǎng)加免疫損傷法成功建立兔動(dòng)脈粥樣硬化模型。2、冠心清化散中、高劑量組可降低動(dòng)脈粥樣硬化兔的TC、TG、LDL-C水平,升高HDL-C的水平。其降脂效果同辛伐他汀(P0.05)。陽(yáng)性藥物組與高、中、低劑量組雖見(jiàn)到脂質(zhì)條紋形成,但陽(yáng)性藥物組與中、高劑量組較模型組相比,內(nèi)膜紅色斑片狀區(qū)明顯減少,與模型組的紅色粥樣斑塊形成鮮明對(duì)比。3、冠心清化散可有效升高SOD含量、降低MDA含量(P0.05),但中劑量組效佳;可有效減少Nox4和p22phox等胞膜NADPH氧化酶活性,降低動(dòng)脈氧化應(yīng)激水平。4、冠心清化抑制CD36的表達(dá);提高ABCA1、ABGA1、SR-B1;減少PPARγ表達(dá)。5、冠心清化散可降低FGFR1、bFGF、p21ras、ERK1/2的蛋白表達(dá)。結(jié)論:1、冠心清化散可明顯改善動(dòng)脈粥樣硬化兔的血脂水平;減少內(nèi)膜脂質(zhì)條紋、動(dòng)脈粥硬化斑塊的形成。2、冠心清化散抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制之一可能為抗氧化應(yīng)激:調(diào)控Nox4和p22phox等胞膜NADPH氧化酶活性,降低動(dòng)脈氧化應(yīng)激水平可能是冠心清化散發(fā)揮抗氧化應(yīng)激的重要機(jī)制。3、冠心清化散抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制之二可能為調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇平衡:抑制CD36的表達(dá),減少巨噬細(xì)胞膽固醇的攝入;提高ABCA1、ABGA1、SR-B1、caveolin-1表達(dá),加強(qiáng)膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn),其機(jī)制考慮與激活或增加PPARγ表達(dá)有關(guān)。4、冠心清化散可抑制Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路,從而減少細(xì)胞增殖與分化,起到保護(hù)細(xì)胞的作用。
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

模型組 21.52±2.52* 4.54±1.36* 12.43±2.69* 4.28±0.64*注：VS正常組*P<0.05。圖1-1 兩組血脂水平情況2 主動(dòng)脈弓整體油紅O染色正常組主動(dòng)脈大體觀察呈乳白色，彈性較好，內(nèi)膜較光滑平整，油紅著色極少。模型組，其主動(dòng)脈油紅O染色結(jié)果與正常組比較其主動(dòng)脈彈性差，內(nèi)膜多處可見(jiàn)斑片狀紅色區(qū)域，即脂質(zhì)條紋形成。見(jiàn)圖1-2。

空白組對(duì)照組圖1-2 主動(dòng)脈弓整體油紅O染色討 論對(duì)于動(dòng)脈粥硬化病因病機(jī)的探討、治療方法的探索、防治藥物的研發(fā)，等等研究的重要工具及前提是，建立穩(wěn)定、可靠、可重復(fù)性高的動(dòng)脈粥硬化動(dòng)物模型。1 模型動(dòng)物的選擇1.1 鼠該模型的病變特點(diǎn)為，病變的形態(tài)及斑塊的破裂位置與人類相似。但有別于人類，斑塊破裂處缺乏纖維蛋白和血栓形成[4]。鼠科中常被用于建立動(dòng)脈粥樣硬化模型的有小鼠和大鼠。1.1.1 小鼠小鼠，在生物分類學(xué)上屬脊椎動(dòng)物門、哺乳動(dòng)物綱、嚙齒目、鼠科、鼷鼠屬、小家鼠種。根據(jù)遺傳可以分為近交系、封閉群和突變系。小鼠具有繁殖快、易于控制、體積小等特點(diǎn)；同時(shí)對(duì)小鼠質(zhì)量控制已有明確標(biāo)準(zhǔn)；現(xiàn)已擁有大量近交系、封閉群和突變系；加之遺產(chǎn)工程小鼠的培育迅速增加，因此在哺乳類各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中，用量最多，用途亦最廣。在動(dòng)脈粥樣硬化模型中，小鼠因其取血不便、動(dòng)態(tài)觀察較難，故很少采用。但隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)和基因敲除技術(shù)的出現(xiàn)，已成功研制出不少新的AS模型小鼠

50圖2-1 血脂水平情況2 主動(dòng)脈弓整體油紅O染色正常組主動(dòng)脈大體觀察呈乳白色，彈性較好，內(nèi)膜較光滑平整，未見(jiàn)油紅著色。模型組，其主動(dòng)脈油紅O染色結(jié)果與正常組比較其主動(dòng)脈彈性差，血管內(nèi)膜表面不平，可見(jiàn)彌漫性、融合成片的紅色粥樣斑塊隆起凸出于表面。陽(yáng)性藥物組與高、中、低劑量組雖見(jiàn)到脂質(zhì)條紋形成，但陽(yáng)性藥物組與中、高劑量組較模型組相比，內(nèi)膜紅色斑片狀區(qū)明顯減少。見(jiàn)附圖1。討 論1 藥物選擇1.1 冠心清化散立方依據(jù)及組方來(lái)源動(dòng)脈粥樣硬化是導(dǎo)致冠心病的重要因素，貫穿于心絞痛、心肌梗死、支架術(shù)后、搭橋術(shù)后、冠心病心衰等系列心血管事件鏈的始終。目前冠心病的治療側(cè)重于穩(wěn)定斑塊，認(rèn)為動(dòng)脈內(nèi)粥樣斑塊越穩(wěn)定越好。黃永生教授在多年的臨床實(shí)踐中，對(duì)斑塊的逆轉(zhuǎn)和消退進(jìn)行了大量的探索

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本文編號(hào)：2762387