【摘要】：本文研究了白屈菜總生物堿的提取方法,化學(xué)成分的動(dòng)態(tài)累積,并探討了不同干燥方法以及不同土壤類型對(duì)白屈菜的品質(zhì)的影響,以期為白屈菜適時(shí)采收,優(yōu)質(zhì)高效生產(chǎn)及馴化栽培管理提供參考。基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的結(jié)果,在生物堿合成途徑中找出三個(gè)關(guān)鍵酶基因,分析在不同時(shí)期的表達(dá)水平,為白屈菜基因差異表達(dá)研究奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1、白屈菜的活性成分多為生物堿類化合物,針對(duì)生物堿類化合物成分的提取,本文設(shè)計(jì)比較了三種常用的方法和溶劑的提取效果,并采用正交實(shí)驗(yàn)方法確定最佳提取工藝。結(jié)果得到:甲醇液中加入0.5%鹽酸,料液比1:50,提取時(shí)間1h,提取效果最佳。2、白屈菜生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中有效成分累積動(dòng)態(tài)研究:檢測(cè)了白屈菜地上、地下部分在整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中有效活性成分即各類生物堿包括原阿片堿、白屈菜堿、黃連堿、小檗堿、血根堿和白屈菜紅堿的動(dòng)態(tài)累積變化。結(jié)果顯示,各個(gè)成分在不同的生長(zhǎng)期成分動(dòng)態(tài)變化規(guī)律均不相同。確定白屈菜適宜采收期:選擇與白屈菜質(zhì)量密切相關(guān)的指標(biāo),得出地上部分的采收時(shí)間為7月份,地下部分為10月份。3、不同干燥方法對(duì)白屈菜品質(zhì)形成的影響研究:比較了陰干、曬干以及不同溫度烘干對(duì)白屈菜品質(zhì)的影響。結(jié)果顯示,不同的干燥方法均能使白屈菜外觀性狀,水分達(dá)到2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定,但藥材有效成分含量存在差異。以測(cè)定的有效成分含量,綜合分析,認(rèn)為60℃烘干可以代替藥典中的曬干或陰干。4、不同土壤類型對(duì)白屈菜品質(zhì)的影響研究,比較了藥園黃褐土,林下腐殖土,老參地土對(duì)白屈菜生物堿類含量的差異,結(jié)果得出差異并不明顯。所以提出,白屈菜可作為人參種植后土地可輪作種植的藥用植物之一。5、基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),從白屈菜生物堿類成分生物合成路徑中,選出基因表達(dá)量差異明顯地三個(gè)基因,酪氨酸脫羧酶,多酚氧化酶,伯胺氧化酶,通過(guò)擴(kuò)增曲線,溶解曲線的考察,建立白屈菜樣本的熒光定量PCR表達(dá)方法,得到了酪氨酸脫羧酶,多酚氧化酶,伯胺氧化酶三個(gè)基因在不同時(shí)期的表達(dá)量,為白屈菜生物堿類成分生物合成機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.1
【圖文】：

白屈菜紅堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

0.8mg/mL、小檗堿 0.848mg/mL、白屈菜紅堿 1.02mg/mL。3.2.2 供試品溶液制備各份樣品陰干后，粉碎，過(guò) 40 目篩。取粉末 1g , 精密稱定，加甲醇 50mL，熱流提取 40min, 冷卻后過(guò)濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，用甲醇溶解蒸發(fā)后所得固體，并定容10mL，搖勻，用 0.45μm 微孔濾膜濾過(guò)，即得。3.2.3 色譜條件色譜柱為 Shim-pack VP-ODSC18 柱（4.6x250mm,5μm），流動(dòng)相為乙腈（A）-0乙酸水溶液（B），梯度洗脫，0~5min，10%~15%A；5~10min,15%~20%A；10min~15m20%~30%A ； 15min~20min ， 30%~35%A ； 20min~25min ， 35%~46%A ； 25~30min46%~60%A；30~35min，60%~80%A；35~40min，80%~100%A；40~45min，100%~80%45~50min ， 80%~50%A ； 50min~55min ， 50%~30%A ； 55min~60min ， 30%~10%A60min~65min，10%A。流速 1mL/min；柱溫 25℃；進(jìn)樣量 20μL；檢測(cè)波長(zhǎng) 270nm。

3.2.7 線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照母液適量，用甲醇稀釋后吸取液體 10μL、20μL、40μL、60μL、80μL100μL，按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），溶液濃度為橫坐標(biāo)（X進(jìn)行線性回歸，得出各個(gè)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，見表 3-1。表 3-1 白屈菜生物堿類化合物線性回歸方程和線性范圍Tab. 3-1 Linear regression analysis parameters of six alkaloids in Chelidonium majus L化合物名稱 線性回歸方程 線性范圍/mg·mL-1R2原阿片堿 Y=7000000x-2961.6 0.0108-0.108 0.9992白屈菜堿 Y=3000000x+8589.6 0.0108-0.108 0.9999黃連堿 Y=40000000x-41487 0.0106-0.106 0.9995血根堿 Y=80000000x-95066 0.01-0.08 0.9992小檗堿 Y=50000000x-58179 0.0106-0.0848 0.9990白屈菜紅堿 Y=100000000x-119217 0.0102-0.102 0.9990

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2758759