【摘要】：心肌缺血性疾病給人們的生命安全和生活質(zhì)量帶來(lái)很大的危害。長(zhǎng)期心肌缺血得不到改善會(huì)帶來(lái)永久性心臟損傷。西醫(yī)對(duì)心肌缺血疾病的治療主要依靠藥物干預(yù)和外科手術(shù)的方法,而外科手術(shù)對(duì)患者的創(chuàng)傷較大,存在較高的風(fēng)險(xiǎn)性。中藥憑借其性質(zhì)溫和及毒副作用低的優(yōu)勢(shì),越來(lái)越受到廣大患者的青睞。葛根素對(duì)治療心肌缺血具有顯著的作用,但是由于葛根素水不溶性從而導(dǎo)致口服葛根素的生物利用率低,限制了葛根素在治療心肌缺血方面的應(yīng)用。因此,通過(guò)對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行修飾,利用靶向遞送方式直接將葛根素富集在心肌缺血的細(xì)胞中,可以較大程度的提升葛根素的生物利用度。本研究利用薄膜分散法經(jīng)超聲水化處理制得空白脂質(zhì)體(LIP)和葛根素脂質(zhì)體(Pue-LIP)。通過(guò)4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)分別處理DSPE-PEG2000-MAL和抗cTnI抗體,經(jīng)過(guò)12h的孵育得到Anti-cTnI Ab-PEG2000-DSPE連接物后和空白脂質(zhì)體孵育得到抗心肌肌鈣蛋白修飾的脂質(zhì)體(Anti-cTnI Ab-LIP),再通過(guò)將Anti-cTnI Ab-PEG2000-DSPE與所制備的葛根素脂質(zhì)體進(jìn)行孵育得到抗cTnI抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體(Anti-cTnI Ab-Pue-LIP)。通過(guò)透射電鏡(TEM)觀察所制備的脂質(zhì)體形態(tài)、采用激光粒度儀檢測(cè)脂質(zhì)體的粒徑和Zeta電位,并計(jì)算包封率、載藥量及藥物釋放。MTT法評(píng)價(jià)脂質(zhì)體毒性。MST評(píng)價(jià)LIP和Anti-cTnI Ab-LIP與cTnI抗原的相互作用情況,以此評(píng)價(jià)抗體與抗原靶向結(jié)合能力。流式細(xì)胞儀和活細(xì)胞工作站檢測(cè)心肌細(xì)胞對(duì)抗體修飾的脂質(zhì)體的攝取情況。小動(dòng)物活體成像技術(shù)檢測(cè)脂質(zhì)體在大鼠心臟部位的攝取強(qiáng)度。采取構(gòu)建大鼠心肌缺血模型的方法,用TTC染色大鼠心臟評(píng)判大鼠心肌缺血模型是否成功建立。通過(guò)大鼠心電圖的分析和小動(dòng)物超聲成像技術(shù)對(duì)Anti-cTnI Ab-Pue-LIP的藥物效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。電鏡觀察所制備的脂質(zhì)體(Anti-cTnI Ab-Pue-LIP)為規(guī)則的圓球形。激光粒度儀檢測(cè)結(jié)果表明,Anti-cTnI Ab-Pue-LIP粒徑均勻分布且平均粒徑均在100-120 nm之間,脂質(zhì)體帶負(fù)電,電荷量在-33.4±0.79 mV左右。Anti-cTnI Ab-Pue-LIP包封率為72.7±1.47%,載藥量為 2.12±0.21%。在 8h 時(shí)測(cè)得的 Anti-cTnI Ab-LIP、Anti-cTnI Ab-Pue-LIP的釋放度分別為47.72±2.37%和46.79±2.46%。小動(dòng)物活體成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Anti-cTnI Ab-LIP體內(nèi)熒光強(qiáng)度最強(qiáng)。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示將藥物用脂質(zhì)體包載后能有效的降低藥物對(duì)細(xì)胞的毒性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明心肌細(xì)胞對(duì)Anti-cTnI Ab-LIP攝取能力為普通脂質(zhì)體的3.6倍。活細(xì)胞工作站結(jié)果顯示Anti-cTnI Ab-LIP能成功富集在心肌細(xì)胞。MST檢驗(yàn)結(jié)果表明Anti-cTnI Ab-LIP與心肌缺血標(biāo)記物心肌肌鈣蛋白(cTnI)的結(jié)合能力更強(qiáng),Kd值為116.3±46.35nM。小動(dòng)物超聲成像顯示Anti-cTnI Ab-Pue-LIP能有效緩解由心肌缺血引起的左室末期容積增大現(xiàn)象;大鼠心電圖結(jié)果顯示Anti-cTnI Ab-Pue-LIP能改善心肌缺血大鼠的心電波動(dòng),使其趨向于正常大鼠的心電圖。以上結(jié)果表明采用薄膜分散法并用超聲處理制得脂質(zhì)體體系穩(wěn)定、粒徑較小、分散均勻且包封率理想。經(jīng)過(guò)抗cTnI抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體對(duì)藥物的釋放沒(méi)有明顯影響。Pue-LIP和Anti-cTnI Ab-Pue-LIP對(duì)細(xì)胞的毒性更小。Anti-cTnI Ab-LIP的靶向性更優(yōu)良能成功富集于缺血心肌細(xì)胞中。Anti-cTnI Ab-Pue-LIP對(duì)心肌缺血的具有良好的治療效果。因此抗cTnI抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體是對(duì)心肌缺血性疾病有良好治療效果的靶向給藥系統(tǒng)。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱商業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R283.6
【圖文】：

哈爾濱商業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文進(jìn)展及成果逡逑栛逡逑植物，生長(zhǎng)在陰濕的環(huán)境中，須根多，塊根深生，呈紡色長(zhǎng)硬毛，發(fā)達(dá)的側(cè)根向四周伸展，相互纏繞成根網(wǎng)狀。絨毛，呈菱片卵圓形或闊卵圓形狀�；ǔ实巫霞t色，黃色粗硬長(zhǎng)毛。其根、藤莖、葉、花和種子均可入藥。其葛根黃酮含量豐富，所以葛根的藥用價(jià)值很高。葛根要成分，此外，葛根中還含有為數(shù)不多的黃酮衍生物、素等。葛根素是植物葛根的主要有效成分。逡逑

圖１－２脂質(zhì)體修飾載藥示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｌｉｐｏｓｏｍｅ逡逑１邋＿３＿２脂質(zhì)體實(shí)現(xiàn)心肌勒向性的作用機(jī)理逡逑脂質(zhì)體（ｌｉｐｏｓｏｍｅ）是一種人工合成的類細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，其基本構(gòu)造和理化性質(zhì)與細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)逡逑相似，所以脂質(zhì)體又稱為人工生物膜。逡逑有相關(guān)科學(xué)實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論，粒徑范圍在２００ｎｍ以上的脂質(zhì)體很容易被血清調(diào)理素吸附，從而逡逑被吞噬性細(xì)胞吞噬；脂質(zhì)體粒徑范圍在５０ｎｍ－１００ｎｍ之間的脂質(zhì)體則可以避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)所吞逡逑噬。根據(jù)機(jī)體對(duì)不同粒徑的脂質(zhì)體的吸收程度不同的特點(diǎn)，就為脂質(zhì)體靶向心肌細(xì)胞提供了理論基逡逑礎(chǔ)。依據(jù)相關(guān)研究，脂質(zhì)體粒徑范圍在１０ｎｍ－１５０ｎｍ之間的可以在心肌細(xì)胞組織集聚，脂質(zhì)體粒徑逡逑在ｌｌＯｎｍ左右的最容易在心肌細(xì)胞組織停留并蓄積。脂質(zhì)體吞噬也會(huì)受到脂質(zhì)體表面電荷量的影逡逑響，與帶中性電荷的脂質(zhì)體對(duì)比，帶正電的脂質(zhì)體與負(fù)電的脂質(zhì)體與吞噬性細(xì)胞結(jié)合更加容易，從逡逑而能起到降低藥物在血液中的半衰期的作用。逡逑由于各方面的原因我國(guó)居民受到心腦血管疾病的困擾，由于心腦血管疾病的組織特異性很低所逡逑以治療的過(guò)程給人們帶來(lái)了極大的痛苦�；颊咝枰哟笏幬飫┝亢蜐舛葋�(lái)達(dá)到治療的目的，這就必逡逑

、據(jù)對(duì)所制備的脂質(zhì)體進(jìn)行評(píng)價(jià)。并對(duì)抗ｃＴｎｌ抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體進(jìn)行了穩(wěn)定性檢測(cè)以及長(zhǎng)逡逑穩(wěn)定性檢測(cè)。測(cè)量了抗ｃＴｎｌ抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體的包封率和載藥量，并且對(duì)葛根素脂質(zhì)體逡逑抗ｃＴｎｌ抗體修飾的葛根素脂質(zhì)體進(jìn)行了藥物釋放方面的對(duì)比和評(píng)價(jià)。逡逑（３）細(xì)胞水平對(duì)所制備的脂質(zhì)體進(jìn)行研宄：重點(diǎn)對(duì)葛根素脂質(zhì)體和抗ｃＴｎｌ抗體修飾的葛根素逡逑質(zhì)體進(jìn)行了細(xì)胞毒性的檢測(cè)，評(píng)價(jià)相關(guān)脂質(zhì)體的安全性。通過(guò)ＭＳＴ檢驗(yàn)所制備的脂質(zhì)體與ｃＴｎｌ逡逑原親和能力評(píng)價(jià)所制備脂質(zhì)體的靶向效果。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和活細(xì)胞工作站檢測(cè)評(píng)價(jià)心肌細(xì)胞對(duì)逡逑制備的脂質(zhì)體的攝取情況。逡逑（４）動(dòng)物水平對(duì)所制備的脂質(zhì)體進(jìn)行研究：通過(guò)對(duì)脂質(zhì)體和抗ｃＴｎｌ抗體修飾的脂質(zhì)體進(jìn)行熒逡逑標(biāo)記，通過(guò)建立大鼠心肌缺血模型并注射經(jīng)過(guò)熒光標(biāo)記的脂質(zhì)體通小動(dòng)物活體成像技術(shù)，考察脂質(zhì)體在大鼠體內(nèi)的分布以及熒光強(qiáng)度對(duì)脂質(zhì)體的靶向性進(jìn)行評(píng)價(jià)。逡逑（５）相關(guān)載藥脂質(zhì)體藥效評(píng)價(jià)：通過(guò)構(gòu)建大鼠心肌缺血模型并對(duì)所建立的模型進(jìn)行檢驗(yàn)，生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)給藥大鼠心電圖的前后變化、利用小動(dòng)物超聲儀檢測(cè)心肌缺血大鼠給藥前后逡逑變化來(lái)評(píng)價(jià)所制備的靶向脂質(zhì)體的藥物療效。逡逑—Ｎｏｉｒｎａｉ邐￣￣、ＬｅｓｉｏｎＭｏｃａｒｄｉａｌ邋ｒｅｌｅａｓｅＣａｒｄｉａｃ邋ｔｒｏｏｎｉｎ邋１１逡逑

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本文編號(hào)：2755308