【摘要】：研究背景:腦出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)是腦卒中最致命的亞型,是一種高度致殘的疾病。腦出血發(fā)生后,腦內(nèi)血腫可以引起一系列病理生理反應(yīng),這些反應(yīng)繼而引起腦出血后進(jìn)一步的氧化應(yīng)激、凋亡等早期腦損傷。研究表明,早期腦損傷的程度對(duì)腦出血預(yù)后影響重大。因此研究腦出血后早期腦損傷的干預(yù),對(duì)幫助患者腦出血后的神經(jīng)功能恢復(fù)十分有必要。葛根素(Puerarin)是從豆科植物野葛的干燥根中提取的主要生物活性成分之一�，F(xiàn)已有多項(xiàng)研究顯示葛根素在各種急性腦損傷可能存在神經(jīng)保護(hù)作用。有越來越多的證據(jù)表明,葛根素可以調(diào)控急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信號(hào)通路,發(fā)揮其有益作用�，F(xiàn)有的研究表明,PI3K/Akt信號(hào)通路的激活與腦出血誘導(dǎo)的腦損傷的改善密切相關(guān)。此外,核因子κB(NF-κB)凋亡通路的激活在腦出血后的炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用,而葛根素可能參與對(duì)此凋亡通路的調(diào)控。目前,葛根素在腦出血中炎癥與氧化應(yīng)激機(jī)制的研究仍鮮有報(bào)道。為了探索葛根素對(duì)腦出血后腦損傷的作用,在我們的本項(xiàng)研究中,我們通過IV型膠原酶誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性大鼠腦出血模型來研究葛根素對(duì)早期腦損傷的影響,并初步分析其可能的分子機(jī)制。目的:探討葛根素治療腦出血后早期腦損傷的作用以及其中可能牽涉的治療早期腦損傷的機(jī)制。方法:采用Ⅳ型膠原酶建立腦出血SD大鼠模型,并對(duì)大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組。在建立模型前后的不同時(shí)間點(diǎn)通過腹腔注射的方式給予葛根素預(yù)處理和后干預(yù)。在第一部分實(shí)驗(yàn)中,為了探索葛根素對(duì)腦出血后大鼠的影響,我們對(duì)不同組別的大鼠分別進(jìn)行神經(jīng)功能缺陷情況評(píng)估(使用mNSS評(píng)分量表);并通過評(píng)估組織學(xué)損傷程度(HE染色)、腦水腫(干濕比重法測(cè)BWC)、顱內(nèi)血腫量(核磁共振),并測(cè)定血腦屏障的破壞程度(依文思藍(lán)染色),以及進(jìn)一步對(duì)腦細(xì)胞凋亡程度進(jìn)行檢測(cè)(TUNEL檢測(cè)),初步探索葛根素對(duì)大鼠腦出血的作用。在第二部分實(shí)驗(yàn)中,進(jìn)行了免疫組織化學(xué)(IHC:NF-kBp65、3-NT、8-OHdG)染色及蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)(WB:NF-kB、Bcl-2、bax、Cleaved-casepase-3),隨后分別對(duì)相關(guān)信號(hào)通路的標(biāo)志蛋白(免疫蛋白印跡法:NF-kBp65、PI3K/Akt)、炎性因子(ELISA:TNF-α,IL-1β,IL-6)以及腦出血后大鼠活性氧族產(chǎn)物(ROS試劑盒:ROS)進(jìn)行檢測(cè)分析。第三部分實(shí)驗(yàn),采用PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002進(jìn)行回復(fù)試驗(yàn)(Rescue Experiment),并通過行為學(xué)評(píng)分及蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)(WB)進(jìn)一步證實(shí)藥物與通路的相關(guān)性。結(jié)果:結(jié)果表明,葛根素干預(yù)能明顯減少腦出血后的早期腦損傷、改善大鼠的神經(jīng)功能缺損(mNSS評(píng)分10.58±1.08v.s.9.17±1.27,p0.05)。這可能是因?yàn)楦鸶啬軠p輕組織學(xué)損傷(HE染色顯著差異)、減少顱內(nèi)血腫體積(104.25±13.86 mm3 v.s.74.12±11.30 mm3,p0.05)、減輕血腦屏障破壞(EB染色:3.31±0.66μg/g腦組織v.s.2.60±0.46μg/g 腦組織,p0.05)、緩解腦水腫(BWC 測(cè)定 83.68±1.31%v.s.80.83±0.48%,p0.01),并且減輕腦細(xì)胞凋亡(p0.05)。進(jìn)一步的探究發(fā)現(xiàn),葛根素可能通過顯著減少NF-κBp65的核轉(zhuǎn)位及其總磷酸化表達(dá)、抑制凋亡途徑的激活(p0.01)、并激活顱內(nèi)血腫周圍腦組織中PI3K/Akt信號(hào)通路蛋白表達(dá)的上調(diào)(p0.01),降低炎性細(xì)胞因子(p0.01)和活性氧族ROS水平(p0.05)起神經(jīng)保護(hù)作用。而PI3K通路抑制劑的使用,揭示了葛根素可能通過該信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)腦神經(jīng)的保護(hù)作用,并提示通路間潛在的交互作用。結(jié)論:葛根素可減輕實(shí)驗(yàn)大鼠腦出血后的早期腦損傷,其機(jī)制可能與抑制NF-κB通路并激活PI3K/Akt信號(hào)通路相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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10 王s

本文編號(hào)：2754397