【摘要】：目的:探討草烏甲素對過敏性哮喘小鼠模型肺部炎癥的治療效果及其可能的機理;分析草烏甲素對LPS激發(fā)的RAW264.7細胞炎癥模型的抗炎效果及其潛在的分子機制。方法:60只SPF級Balb/c雌鼠(20±2g),隨機分為6組:陰性對照組(NC組);哮喘組(Asthma組);草烏甲素低劑量治療組(BLA-L組:0.16 mg/kg);草烏甲素中劑量治療組(BLA-M組:0.32 mg/kg);草烏甲素高劑量治療組(BLA-H組:0.48 mg/kg);地塞米松陽性治療組(Dex組:1 mg/kg)。哮喘組及BLA各劑量組分別于第0、7及14天進行OVA 10μg與2%氫氧化鋁混懸液0.2m L腹腔注射。從第22天起,各組小鼠霧化吸入5%OVA致敏液激發(fā),每天一次,每次30分鐘,持續(xù)霧化7天。陰性對照組用PBS代替致敏液,其余條件與用藥組相同。每次霧化前30分鐘,BLA低劑量組、中劑量組以及高劑量組小鼠分別給予BLA0.16mg/kg、0.32mg/kg、0.48mg/kg,腹腔注射0.2m L,陰性對照組及哮喘組則用等量的PBS代替。第28天處死小鼠。(1)收集血清,酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清中總Ig E、總Ig G水平;(2)收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),ELISA法檢測細胞因子IL-4、IL-10、TNF-α與MCP-1水平;同時對BALF中的白細胞(包括白細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞)進行細胞分類計數(shù);(3)取肺組織并進行常規(guī)石蠟包埋,行HE染色觀察組織學改變;(4)Western Blotting檢測肺組織中NF-κB信號通路中關鍵蛋白NF-κB1與PKC-δ的表達水平。小心從液氮罐中取出凍存的RAW264.7,細胞復蘇后添加10%的胎牛血清、1%青霉素與鏈霉素的雙抗的DMEM高糖完全培養(yǎng)基在37℃、5%的CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng),細胞經傳代后凍存留種用于后續(xù)實驗。細胞種板后設置如下組別:Control組,單用草烏甲素組(60μg/m L),LPS組(100μg/m L),LPS+BLA(10μg/m L),LPS+BLA(30μg/m L),LPS+BLA(60μg/m L),收集細胞后進行如下檢測。(5)培養(yǎng)巨噬細胞RAW264.7,CCK-8確定藥物安全范圍;(6)ELISA法檢測細胞上清液炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1的水平;(7)WB檢測NF-κB信號通路中關鍵蛋白同(4)。結果:小鼠血清中總Ig E、總Ig G的水平的結果表明,與哮喘組(64.16±5.91)ng/m L相比,草烏甲素低中高治療組(44.38±3.56)、(32.48±2.62)、(24.54±2.11)ng/m L、Dex組(25.48±1.30)ng/m L總Ig E水平明顯降低(P0.01),其中用藥組中高劑量組效果最為顯著;與哮喘組(34.38±2.08)ng/m L相比,BLA-L組(25.41±1.19)ng/m L、BLA-M組(18.66±0.78)ng/m L、BLA-H組(17.70±0.63)ng/m L的總Ig G含量顯著降低(P0.01);而Dex組(15.72±0.46)ng/m L的Ig G含量最低。由此我們認為,草烏甲素治療可顯著降低血清總Ig E和總Ig G水平,并呈現(xiàn)劑量依賴性。肺泡灌洗液中細胞因子IL-4、IL-10、TNF-α與MCP-1的水平結果表明:與哮喘組(339.47±2.52)pg/m L相比,草烏甲素低中、高處理組BALF(298.82±3.86)、(277.89±7.53)、(277.81±5.98)pg/m L中IL-4的含量降低(P0.01)。與哮喘組(454.25±23.16)pg/m L相比,草烏甲素低中、高處理組(376.24±27.12)、(260.10±17.59)、(245.50±17.92)pg/m L中TNF-α含量逐步降低(P0.01)且BLA-H組效果最佳。草烏甲素中、低、高處理組的細胞因子IL-10均大于哮喘組(26.20±1.35)pg/m L(P0.01),Dex組(99.00±4.35)與BLA-H組(97.53±8.60)pg/m L無差異。NC組、AS組、BLA-L組、BLA-M組、BLA-H組、Dex組的細胞因子MCP-1水平分別為(336.15±37.81)、(670.64±52.74)、(630.68±37.66)、(410.39±10.97)、(518.13±25.20)、(360.97±21.66)pg/m L。與哮喘組相比,BLA-L組MCP-1含量下降(P0.05),而BLA-M組與BLA-H組含量顯著減少(P0.01)。不同劑量草烏甲素能有效抑制哮喘小鼠肺泡灌洗液中炎性因子IL-4、TNF-α與MCP-1的含量。為了了解草烏甲素對肺泡灌洗液中細胞數(shù)量的影響,我們對其進行分類計數(shù)。結果草烏甲素處理組的Eos數(shù)量明顯低于哮喘組(5.58±0.22)×104/m L(P0.01);與BLA-H組(1.46±0.16)×104/m L相比,Dex組治療(1.29±0.20)×104/m L的效果更佳。與哮喘組(0.47±0.05)相比,BLA-M組(0.35±0.04)、BLA-H組(0.30±0.03)、Dex組(0.39±0.04)×104/m L淋巴細胞數(shù)量降低(P0.05),BLA-L組(0.52±0.07)×104/m L對淋巴細胞的抑制作用不顯著(P0.05)。草烏甲素處理組巨噬細胞數(shù)顯著低于哮喘組(4.85±0.34)(P0.01)。與BLA-L組(2.36±0.36)相比,BLA-M組(1.75±0.20)、BLA-H組(1.13±0.19)及Dex組(1.25±0.26)×104/m L巨噬細胞減少(P0.01)。BLA-H組與Dex組之間差異無統(tǒng)計學意義。肺組織HE染色顯示草烏甲素治療后能顯著減輕肺部炎性細胞浸潤,且結構完整性明顯改善,其中BLA-H組效果最明顯。WB檢測結果表明BLA處理可引起肺組織中NF-κB信號通路NF-κB1與PKC-δ表達下調。CCK-8實驗表明草烏甲素在小于60μg/m L濃度時對RAW264.7細胞活力沒有顯著影響,因此將10、30和60μg/m L濃度分別作為后續(xù)實驗的低、中、高劑量組。草烏甲素能有效抑制LPS誘導RAW264.7細胞炎癥因子及炎癥介質IL-6、TNF-α和MCP-1的含量,IL-1β的表達沒有意義。草烏甲素能有效抑制LPS誘導的RAW264.7細胞轉錄因子NF-κB信號通路中NF-κB1和PKC-δ入核。結論:1.草烏甲素能夠減輕過敏性哮喘小鼠的肺部炎癥狀態(tài);可能是通過抑制PKC-δ/NF-κB信號實現(xiàn)的。2.草烏甲素抑制LPS誘導的RAW264.7細胞炎性因子IL-6,TNF-α和MCP-1的釋放。3.草烏甲素通過抑制LPS誘導的NF-κB信號通路的活化從而發(fā)揮抗炎作用。
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1.草烏甲素分子結構圖擬通過以下研究探討 BLA 在過敏性哮喘小鼠中的抗炎作用：過卵白蛋白（Ovalbumin，OVA）致敏 Balb/c 雌鼠，建立

動物模型復制示意圖

圖 3.草烏甲素對血清總 IgE、總 IgG 的影響 組相比，P < 0.01；b，與 BLA-L 組相比，P < 0.01；c，與 BLA-M 相相比，P < 0.01；b，與 BLA-L 組相比，P < 0.01；c，與 BLA-M 組相LA-H 組相比，P < 0.05。

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4 北京大學第一醫(yī)院呼吸科教授 遲春花;過敏性哮喘：八成對螨蟲過敏[N];大眾衛(wèi)生報;2007年

5 余寧寧;治療過敏性哮喘有新手段[N];健康報;2006年

6 許成文（作者為上海市肺科醫(yī)院延慶路門診部主任醫(yī)師、教授）;春季應防過敏性哮喘[N];文匯報;2003年

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本文編號：2752656