【摘要】：目的:在中醫(yī)健脾益氣理論指導(dǎo)下,利用聽(tīng)覺(jué)腦干誘發(fā)電位(ABR)技術(shù)、耳蝸鋪片技術(shù)、RT-PCR(Real-time Polymerase Chain Reaction)技術(shù),觀察復(fù)方健耳劑拆方之補(bǔ)氣藥干預(yù)慶大霉素耳毒性聾的聽(tīng)功能、耳蝸毛細(xì)胞影響作用,并通過(guò)對(duì)耳蝸超氧化物歧化酶1(Superoxide Dismutase 1,SOD1)的檢測(cè),探討基于活性氧介導(dǎo)的慶大霉素耳蝸毛細(xì)胞損害的病理機(jī)制,以及中藥保護(hù)作用藥理機(jī)制。通過(guò)對(duì)血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatine,Cr)的檢測(cè)、腎組織切片,觀察中藥對(duì)腎功能和腎組織的保護(hù)作用,探討護(hù)腎與護(hù)耳的關(guān)系,以及中醫(yī)脾為后天之本與腎為先天之本,“腎開(kāi)竅于耳”等理論的科學(xué)根據(jù)。方法:選擇正常健康豚鼠54只,隨機(jī)分成正常對(duì)照組、慶大霉素(Gentamicin,GM)對(duì)照組、中藥+GM對(duì)照組各18只。正常對(duì)照組,不作任何藥物處理,常規(guī)飼養(yǎng)至11天。GM對(duì)照組,按照200mg/kg/d劑量,每天注射2次,連續(xù)9天后停藥,第11天終止飼養(yǎng)。中藥+GM對(duì)照組預(yù)先連續(xù)服用復(fù)方健耳劑拆方11號(hào)10天,按照3.994g(kg/d)劑量,然后在繼續(xù)服用中藥同時(shí)開(kāi)始注射GM,GM用量和方法同GM對(duì)照組,連續(xù)9天同時(shí)停藥,第11天終止飼養(yǎng)。每組取6只動(dòng)物行ABR測(cè)試,了解聽(tīng)力狀況。6只動(dòng)物分別取心臟血液用于血清BUN、Cr檢測(cè),了解腎功能;取腎臟用于腎組織切片染色,了解腎組織形態(tài)學(xué);取耳蝸用于耳蝸鋪片,了解耳蝸毛細(xì)胞形態(tài)學(xué)并計(jì)數(shù)毛細(xì)胞。另6只動(dòng)物耳蝸通過(guò)RT-PCR測(cè)定SOD1,提供基于活性氧途徑分析依據(jù)。所得數(shù)據(jù)最后經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果:第9天中藥+GM對(duì)照組的ABR閾值與GM對(duì)照組比較,差異存在顯著性意義(P0.05),與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第11天耳蝸鋪片顯示,正常對(duì)照組內(nèi)、外毛細(xì)胞排列整齊,無(wú)細(xì)胞缺損;GM對(duì)照組外毛細(xì)胞破壞嚴(yán)重,呈片狀崩解,殘缺不全,但內(nèi)毛細(xì)胞基本未受影響;中藥+GM組外毛細(xì)胞破壞較輕,呈散在崩解缺失,內(nèi)毛細(xì)胞未受影響。GM對(duì)照組與其他兩組比較,差異均有顯著性意義(P0.05)。中藥+GM組與正常對(duì)照組比較,差異有顯著性意義(P0.05)。第11天腎切片顯示,正常對(duì)照組腎組織細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)正常,GM對(duì)照組腎組織細(xì)胞與結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重,而中藥+GM組腎組織細(xì)胞與結(jié)構(gòu)受損較輕,基本保護(hù)較好。GM對(duì)照組BUN、Cr兩項(xiàng)指標(biāo)均高于其他兩組,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,差異均有顯著性意義(P0.05),而中藥+GM組與正常對(duì)照組比較,差異則無(wú)顯著性意義(P0.05)。第11天中藥+GM組耳蝸SOD1表達(dá)均高于其他兩組,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,差異均有顯著性意義(P0.05)。結(jié)論:豚鼠GM200mg/天造模成功。GM對(duì)耳蝸破壞主要影響外毛細(xì)胞,且底回破壞較頂回嚴(yán)重。GM對(duì)耳蝸外毛細(xì)胞和聽(tīng)力損害以及腎臟和腎功能都有損害。復(fù)方健耳劑拆方補(bǔ)氣類(lèi)中藥具有明顯同時(shí)保護(hù)豚鼠GM致耳蝸外毛細(xì)胞和聽(tīng)功能損害以及腎臟和腎功能損害的作用。中藥藥效作用與其通過(guò)對(duì)機(jī)體SOD系統(tǒng)激活,清除氧自由基,從而阻止活性氧介導(dǎo)細(xì)胞凋亡通路有關(guān)。中藥護(hù)腎作用,是其拮抗GM耳毒性損害的中藥機(jī)制之一。中醫(yī)“腎開(kāi)竅于耳”理論具有一定科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【圖文】：

1.A1、A2、A3 分別表示正常對(duì)照組豚鼠耳蝸的底回、中回、頂回外毛細(xì)胞情況（X400）B1、B2、B3 分別表示 GM 組對(duì)照豚鼠耳蝸的底回、中回、頂回外毛細(xì)胞情況（X400）C1、C2、C3 分別表示中藥+GM 組對(duì)照豚鼠耳蝸的底回、中回、頂回外毛細(xì)胞情況（X43.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用 SPSS22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以 X ±S 表示，3 組間采用單因素方差分析，兩組之間比較用 LSD-t 分析。P<0.05 為差異計(jì)學(xué)意義。3.3 毛細(xì)胞計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果從 GM 對(duì)照組、中藥+GM 對(duì)照組、正常對(duì)照組中各選 6 耳，制成蝸完整鋪片，計(jì)算全耳蝸外毛細(xì)胞在固定視野中的計(jì)數(shù)。其中正常組毛細(xì)胞計(jì)數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他兩組，單因素方差分析組間比較，P=0.

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2750062