【摘要】：目的:探討花旗松素(Tax)抑制小鼠子宮炎癥的效應及對炎癥部位巨噬細胞及相關細胞因子的調節(jié)機制。方法:性成熟小鼠25只隨機分為對照組和處理組。處理組又分為LPS處理組、LPS+低濃度Tax(25 mg/kg)處理組、LPS+中濃度Tax(50 mg/kg)處理組及LPS+高濃度Tax(100 mg/kg)處理組。對照組、LPS處理組采取每天上午9點灌胃PBS 0.4 ml,1次/天;其中,對照組于第5天尾部靜脈注射PBS 0.2 ml;LPS處理組于第5天尾靜脈注射LPS 0.2ml;LPS+Tax 25 mg/kg處理組每天上午9點灌胃25 mg/kg Tax,LPS+Tax 50 mg/kg處理組每天灌胃50 mg/kg Tax,LPS+Tax 100 mg/kg處理組每天灌胃100 mg/kg Tax,LPS+低、中、高Tax處理組均于第5天尾靜脈注射LPS 0.2 ml,所有LPS處理小鼠注射至第6天。所有小鼠第8天頸椎脫臼法處死,摘取子宮,觀察其外形變化并用于后續(xù)檢測。免疫組織化學技術檢測對照組和處理組小鼠子宮中CD86~+(M1)和CD163~+(M2)型巨噬細胞的數(shù)量和分布差異,ELISA法檢測各實驗組炎性細胞因子TNF-α和抑制炎癥性細胞因子IL-10的含量差異,驗證Tax的抑制炎癥效應。qPCR技術檢測各實驗組小鼠子宮組織中M2型巨噬細胞趨化因子CXCL12及其受體CXCR4 mRNA表達差異,western blot檢測CXCL12及其受體CXCR4蛋白水平的表達差異,判定Tax的抗炎機制。結果:LPS處理小鼠至小鼠子宮致炎后,免疫組化檢測結果發(fā)現(xiàn)與對照組實驗小鼠相比,LPS處理組的小鼠白子宮中M1型巨噬細胞表面標志分子CD86在LPS處理的第4天表達量增加,差異達到了極顯著水平。而當用不同濃度Tax處理炎性子宮小鼠時,隨著Tax的處理濃度的增加,CD86的表達量呈下降趨勢,LPS+Tax 100 mg/kg處理組炎癥性子宮中CD86的表達量參照于對照組無明顯差異。同樣方法檢驗M2型巨噬細胞表面標志蛋白CD163,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,LPS處理后,一定時間內(nèi)小鼠子宮中CD163的表達量下降,且差異達到了極顯著水平。隨著Tax處理濃度的增加,CD163的表達量呈升高趨勢,中濃度Tax處理組參照于對照組差異呈現(xiàn)顯著升高變化,LPS+Tax 100 mg/kg處理組與對照組差異則不明顯。ELISA實驗結果表明LPS處理小鼠致小鼠子宮產(chǎn)生炎癥后,小鼠子宮中TNF-α的表達量急劇升高,與對照組差異比較明顯,為極顯著水平。當用不同濃度的Tax的處理后,小鼠子宮中TNF-α的表達量隨Tax處理濃度的增加,表達量下降。同時檢測抑炎性細胞因子IL-10表達變化,結果顯示為隨著Tax處理濃度的增加,IL-10的表達呈現(xiàn)相對應的升高趨勢。qPCR和western blot分別用于檢測M2型巨噬細胞趨化因子CXCL12及其受體CXCR4 mRNA和蛋白的表達差異,結果顯示LPS于尾靜脈注射小鼠后,二者在基因和蛋白水平上表達均下降,高濃度Tax處理組小鼠子宮中CXCL12基因和蛋白的表達量與對照組相比差異不顯著,CXCR4蛋白的表達量雖已升高,但與對照組相比差異仍比較明顯,為顯著水平。隨著Tax的處理濃度的增加,二者表達水平都顯現(xiàn)出相應上升的趨勢。結論:(1)由各實驗組小鼠子宮外形變化及免疫組化、ELISA實驗結果顯示,一定濃度的Tax可有效抑制小鼠子宮的炎癥反應。(2)Tax對抗小鼠子宮炎癥的機制之一可能是Tax通過調節(jié)M2型巨噬細胞趨化蛋白CXCL12及其受體CXCR4的表達影響炎性部位巨噬細胞極化方向,并進一步影響不同種類細胞因子的生成。(3)一定濃度的Tax對Th1免疫反應具有抑制作用,對Th2免疫反應具有促進作用。
【學位授予單位】：河南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1-1 Tax 結構式Fig. 1-1 The structure formula of Tax號通路相關[108]。王秋月等的研究經(jīng)元具有較好的保護功能，其作用弱了細胞的凋亡的效應[109]。佟苗苗minotransferase ） 和 天 冬 氨 酸 氨肝實質損害指標的檢測確定 Tax 有]。Tax 的初步研究證明其具有上述多x 早在 2009 年之前就用于關于心腦文獻表明，Tax 具有很好的抗炎、抗關于 Tax 抗衰老和細胞凋亡效應，

.1 Tax 對炎性小鼠子宮中巨噬細胞的影響.1.1 Tax 對炎性小鼠子宮 CD86+（M1 型）巨噬細胞的影響表 3-1 不同濃度 Tax 對小鼠子宮組織 CD86+（M1 型）巨噬細胞數(shù)目的影響（n=5，x ±SD）Table.3-1 The influence of different concentrations of Tax on mouse uterine tissue CD86+(M1) macrophage number. (n=5, x ±SD)組別Group陽性細胞數(shù)Positive cell number差異顯著性Significance of differenceα=0.05 α=0.01對照組 214.40±15.24 d CLPS 298.20±11.80 a ALPS+Tax 25mg/kg 265.00±12.48 b BLPS+Tax 50mg/kg 247.80±6.46 c BLPS+Tax100mg/kg 217.20±13.39 d C注：小寫字母表示 P<0.05，大寫字母表示 P<0.01Note: lowercases mean P<0.05, capitals mean P<0.01

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本文編號：2735521