【摘要】：目的:采用HPLC法探究何首烏(Polygonum multiflorum Thunb.)九蒸九曬炮制過程中指標性成分二苯乙烯苷、游離蒽醌和結(jié)合蒽醌含量的變化規(guī)律;同時對影響何首烏炮制品質(zhì)量的因素進行考察,采用正交試驗優(yōu)化何首烏九蒸九曬炮制工藝,為何首烏的炮制提供新的工藝參數(shù);在優(yōu)化工藝的基礎(chǔ)上對何首烏進行質(zhì)量方面的考察研究,擬定相應(yīng)的質(zhì)量標準草案,以更好地揭示何首烏九蒸九曬炮制的內(nèi)涵。最后采用細胞實驗對何首烏各炮制品的肝細胞活性做初步研究,探究何首烏九蒸九曬的合理性,為何首烏炮制減毒和臨床用藥安全性提供實驗依據(jù)。方法:1.經(jīng)典與現(xiàn)代兩種炮制方法指標性成分含量變化規(guī)律的研究結(jié)合文獻,采用HPLC法測定何首烏九蒸九曬炮制品中指標性成分的含量,并與藥典法何首烏比較,分析其變化規(guī)律。2.九蒸九曬炮制工藝的研究確定因素和水平,以指標性成分的含量為考察指標,采用正交試驗,優(yōu)選何首烏最佳炮制工藝。3.質(zhì)量標準研究依照2015版《中國藥典》的檢測方法,對不同批次的何首烏炮制品的性狀、顯微、薄層、水分、總灰分、浸出物和指標性成分的含量進行考察,對其質(zhì)量進行初步評價。最后,依據(jù)實驗結(jié)果,擬定何首烏九蒸九曬質(zhì)量標準草案。4.何首烏各炮制品對肝細胞活性作用的研究采用CCK-8法測定九蒸九曬何首烏及正交實驗各炮制品對正常人L02肝細胞的抑制率的影響,探究何首烏九蒸九曬的合理性。結(jié)果:1.經(jīng)典與現(xiàn)代兩種炮制方法指標性成分含量變化規(guī)律的研究九蒸九曬炮制品中,二苯乙烯苷的含量隨蒸曬次數(shù)的增加呈明顯下降趨勢,結(jié)合蒽醌和總蒽醌含量整體呈下降趨勢,游離蒽醌的含量逐漸增加。藥典法何首烏各成分的含量與九蒸九曬品中的四蒸四曬品接近。2.九蒸九曬炮制工藝的優(yōu)化通過前期實驗,確定蒸制時間(A)、曬制時間(B)和蒸曬次數(shù)(C)三個因素,并分別設(shè)置三水平,以二苯乙烯苷、游離蒽醌及結(jié)合蒽醌含量為考察指標進行正交試驗。結(jié)果顯示A_3B_1C_3為何首烏最佳炮制工藝,即蒸制4 h、曬制4 h、蒸曬11次。其中,影響何首烏九蒸九曬炮制工藝因素的主次順序為:ACB,即蒸制時間蒸曬次數(shù)曬制時間。3.何首烏九蒸九曬質(zhì)量標準草案的擬定對14個批次的何首烏進行外觀性狀、水分、顯微、薄層、總灰分、浸出物及指標性成分含量的檢測,評價何首烏炮制品的質(zhì)量。其中,水分的平均值是13.51%,范圍9.15~16.35%;總灰分的平均值是2.75%,范圍2.12~4.98%;浸出物含量的平均值是5.07%,范圍0.77~10.39%;二苯乙烯苷含量的平均值是1.43%,范圍0.49~3.12%;游離蒽醌含量的平均值是0.295%,范圍0.147~0.611%;結(jié)合蒽醌含量的平均值是0.009%,范圍0.001~0.024%。最終,何首烏九蒸九曬質(zhì)量標準草案確立。4.何首烏各炮制品對肝細胞活性作用的研究炮制程度越深,何首烏對肝細胞的抑制率越弱。結(jié)論:1.經(jīng)典與現(xiàn)代兩種炮制方法指標性成分含量變化規(guī)律的研究炮制對指標性成分含量產(chǎn)生影響,可能與何首烏炮制減毒作用相關(guān)。2.優(yōu)化何首烏九蒸九曬的炮制工藝擬定炮制工藝參數(shù)為“蒸制4h、曬制4h、蒸曬11次”,在提升產(chǎn)品質(zhì)量的同時,為大規(guī)模生產(chǎn)提供了實驗依據(jù)。3.擬定的何首烏質(zhì)量標準應(yīng)符合性狀、顯微及薄層鑒別的要求,二苯乙烯苷含量不得少于0.40%,游離蒽醌含量不得少于0.100%,結(jié)合蒽醌的含量不得高于0.020%。4.何首烏各炮制品對肝細胞活性作用的研究細胞抑制率與炮制程度呈現(xiàn)一定的相關(guān)性,何首烏九蒸九曬具有一定的合理性。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R283
【圖文】：

素、大黃素甲醚混合對照品；B. 何首烏及各炮制品游離蒽醌含量疊加圖；C. 何測疊加圖 1. 大黃素；2.大黃素甲醚；S1-S9. 一蒸一曬品至九蒸九曬品；S10. 藥S11. 何首烏生品圖 2 （制）何首烏蒽醌類含量測定 HPLC 色譜圖第二節(jié) 正交試驗水平的確定文獻查閱及前期對何首烏九蒸九曬主要化學(xué)成分變化規(guī)律的制時間、曬制時間及炮制次數(shù)對其主要成分含量變化有較大素進行考察。對于水平的確定，蒸制時間多參考古代文獻。豆半碗煮熟去豆”、“用竹刀刮去黑皮，米泔浸二日，切片，每豆三斗，每次用三升三合三勺，以水浸過甑內(nèi)，鋪豆一層藥一鍋上蒸之，豆熟為度。去豆用，九蒸九曬為佳�！�、“米泔水浸皮，切片，黑豆五升同首烏滾水浸一時，蒸熟去豆”、“水浸一

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【參考文獻】

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本文編號：2732141