【摘要】：目的:探討膝痛顆粒方對KOA的治療作用與SDF-1/CXCR4信號通路的相關性。方法:將60只7周齡的SD大鼠,適應性喂養(yǎng)一周后,按隨機數(shù)字表法分為6組:空白組、模型組、硫酸氨基葡萄糖組、膝痛顆粒方(分低、中、高濃度)組。予空白組大鼠的右膝關節(jié)注射50ul生理鹽水,向其他各組大鼠的右膝關節(jié)注射50ul濃度為40mg/ml碘乙酸鈉溶液建立KOA模型,確認模型成功后,用不同藥物干預28天后取材。對各組大鼠右膝關節(jié)組織切片HE染色后進行形態(tài)學觀察,評估其炎癥程度;通過雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA法)檢測血清中IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13蛋白表達情況;通過免疫組化法檢測關節(jié)滑膜中趨化因子SDF-1蛋白及其關節(jié)軟骨中受體CXCR4的表達情況。結果:1.肉眼下大體觀察及HE染色讀片發(fā)現(xiàn):空白組大鼠的關節(jié)軟骨表面光滑,滑膜細胞排列整齊,未見炎性細胞浸潤;模型組可見明顯的骨性關節(jié)炎的表現(xiàn),肉眼下可見嚴重軟骨破壞,負重區(qū)可見軟骨下骨,顯微鏡下可見絨毛上皮細胞增生,伸入關節(jié)腔;立方上皮細胞和滑膜細胞增生,并伴隨大量血管增生;視野中可見炎性細胞聚集,局部滑膜組織發(fā)生纖維化。其余各組均可見不同程度的軟骨破壞、滑膜增生纖維樣變及炎性細胞浸潤,均較模型組大鼠輕。藥物干預組中以膝痛顆粒方高濃度組大鼠的關節(jié)破壞程度最輕;2.ELISA法檢測結果分析顯示:與空白組相比較,模型組與藥物干預的各組的四項指標均明顯升高,P0.05;且藥物干預組與模型組相比,四項指標均不同程度的低于模型組,P0.05;陽性藥物硫酸氨基葡萄糖與不同濃度的膝痛顆粒方對比分析時發(fā)現(xiàn),A組與L組在炎癥因子和基質金屬蛋白酶的水均平近似,P0.05,A組與M組對比分析發(fā)現(xiàn),M組的炎癥因子水平及基質金屬蛋白酶的表達水平明顯低于A組,除IL-1β意外,均見P小于0.05;H組則明顯優(yōu)于A組,P0.05;比較不同濃度的膝痛顆粒方組之間的炎癥因子和基質金屬蛋白酶的水平時發(fā)現(xiàn),四項指標具有相同的趨勢,即L組M組H組,M組與L組,P小于0.05,M組與H組比較分析無顯著統(tǒng)計學差異。3.免疫組化法檢測數(shù)據(jù)結果分析顯示:與空白組相比較,模型組與藥物干預的各組SDF-1和CXCR4的光密度值明顯高,即陽性細胞率明顯高于空白組,P0.05;且藥物干預組與模型組相比,陽性細胞率明顯要低,P0.05;陽性藥物硫酸氨基葡萄糖與不同濃度的膝痛顆粒方對比分析時發(fā)現(xiàn),前者的滑膜細胞表達SDF-1的陽性率及軟骨細胞表達CXCR4的陽性率明顯要高后者,P0.05;比較不同濃度的膝痛顆粒方組之間的SDF-1蛋白及其受體的細胞陽性率時發(fā)現(xiàn),基質細胞衍生因子-1與其受體的表達有相同的趨勢,即L組M組H組,H組與L組相比,P0.05。結論:膝痛顆粒方能降低OA關節(jié)中炎癥因子IL-1β、TNF-α的含量,減輕炎癥的級聯(lián)放大反應,抑制滑膜細胞產生趨化因子SDF-1的表達,從而抑制SDF-1/CXCR4信號通路,下調MMP-3、MMP-13的表達,抑制分解代謝,從而起到治療膝關節(jié)骨性關節(jié)炎的作用。經過組間數(shù)據(jù)比較,發(fā)現(xiàn)膝痛顆粒方的對于改善KOA相關指標的效果優(yōu)于硫酸氨基葡萄糖膠囊。
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

使用顯微鏡（ＤＭ３０００）觀察各組大鼠膝關節(jié)ＨＥ染色病理片可見：逡逑空白組：關節(jié)腔完整，關節(jié)軟骨面光滑，滑膜細胞排列整齊，未見炎性細胞。逡逑模型組：滑膜組織可見絨毛上皮細胞增生，伸入關節(jié)腔；立方上皮細胞和滑膜細生，并伴隨大量血管增生；視野中可見炎性細胞聚集，局部滑膜組織發(fā)生纖維化，缺損，負重區(qū)域明顯；逡逑硫酸氨基葡萄糖組：滑膜細胞增生，排列趨于規(guī)整，可見大量血管增生，軟骨面；逡逑膝痛顆粒方低劑量：滑膜細胞增生，排列紊亂，可見纖維化，局部血管增生；軟粗糙；逡逑膝痛顆粒方中劑量：滑膜細胞增生，仍可見大量血管增生，關節(jié)腔完整，軟骨面滑；逡逑膝痛顆粒方高劑量：滑膜細胞排列整齊，有少量增生。關節(jié)軟骨基本平滑。逡逑

圖２各組炎癥因子表達情況逡逑注：＃：與空白組比較ｐ＜０．邋０５，邋＃＃：邋ｐ＜０．邋０１；邋＊：與模型組比較ｐ＜０．邋０５，林：ｐ＜０．邋０１逡逑ＭＭＰ－３／ＭＭＰ－１３逡逑１５－逡逑ｉｉｍ逡逑４￥）逡逑ｇ邋１0＿邐＃＃邐Ｅｉｕ邐ＭＭ邋Ｐ－３逡逑Ｖ邐ｍ邐ｌｉ邐Ｂ邐ＭＭＰ－１３逡逑｜邐自邐＝－逡逑＾邐Ｓ邋ｍ邐甜邐＝＿Ｔ＿＃＃邋＾邋＊＊逡逑？５邐Ｓ邋＊＊邐＊＊邐＝白邋＊＊邋＊４邋白逡逑．ｓ邐＊＊邋＂ｉ├煎義希輳歟

本文編號：2731196