發(fā)布時間：2020-06-26 11:43

【摘要】：目的:基于核磁共振(~1H-NMR)代謝組學技術,結合生化指標分析,研究交泰丸對失眠模型大鼠的干預作用,探討交泰丸干預失眠的作用機制。方法:將雄性SD大鼠隨機分為正常組、模型組和交泰丸組。交泰丸組灌胃交泰丸水提液,每天1次,連續(xù)5天,正常組和模型組灌胃等體積生理鹽水。實驗第3天,模型組和交泰丸組一次性腹腔注射PCPA甲酯鹽酸鹽(564 mg·kg-1,相當于PCPA 450mg·kg-1)建立失眠模型,正常組一次性腹腔注射等體積生理鹽水。實驗期間觀察大鼠自發(fā)活動變化�；趡1H-NMR代謝組學技術測定尿液樣本、血清樣本和海馬組織的代謝物圖譜,對代謝物圖譜進行正交偏最小二乘判別分析(Orthogonal Partial Least-Squares Discriminant Analysis,OPLS-DA),運用變量重要性投影(Variable Importance in the Projection,VIP)和t檢驗篩選出組間具有顯著差異的代謝物。用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測大鼠下丘腦、海馬、前額葉皮質和血清中神經保護因子如腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)、神經生長因子(NGF)水平,凋亡相關因子如B細胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)及其相關X蛋白(Bax),神經遞質如谷氨酸(Glu)、膽囊收縮素8(CCK-8)水平,細胞因子白細胞介素(IL)-2、IL-6和膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)水平,并采用考馬斯亮藍法(Bradford法)測定組織樣品蛋白含量。結果:1.交泰丸能明顯抑制失眠大鼠自發(fā)活動。2.(1)與正常組相比,模型組大鼠尿液中N-乙酰糖蛋白、丙酮、丙酮酸、琥珀酸、α-酮戊二酸、二甲胺水平顯著降低(P0.05),二甲基甘氨酸、牛磺酸、苯乙酰甘氨酸水平顯著升高(P0.05),與模型組比較,交泰丸組大鼠尿液中N-乙酰糖蛋白、丙酮酸、琥珀酸、α-酮戊二酸、二甲胺水平顯著升高(P0.05),二甲基甘氨酸、牛磺酸、苯乙酰甘氨酸水平顯著降低(P0.05);(2)與正常組相比,模型組大鼠血清中LDL/VLDL、不飽和脂肪酸、異亮氨酸、N-乙酰糖蛋白、谷氨酸、O-乙酰糖蛋白、膽堿、磷酸膽堿、氧化三甲胺水平顯著升高(P0.05),與模型組比較,交泰丸大鼠血清中LDL/VLDL、異亮氨酸、N-乙酰糖蛋白、谷氨酸、膽堿、磷酸膽堿水平顯著降低(P0.05);(3)與正常組比較,模型組大鼠海馬中丙氨酸、γ-氨基丁酸、肌醇水平顯著降低(P0.05),N-乙酰天冬氨酸、肌酸/磷酸肌酸、甘油磷酸膽堿、�；撬崴斤@著升高(P0.05),與模型組比較,交泰丸大鼠丙氨酸、γ-氨基丁酸、肌醇水平顯著升高(P0.05),甘油磷酸膽堿、�；撬崴斤@著降低(P0.05)。3.與正常組比較,模型組大鼠下丘腦、海馬、前額葉皮質和血清中IL-2、IL-6、BDNF、NGF、CCK-8水平顯著降低(P0.05),下丘腦、海馬、前額葉皮質和血清中GFAP、Glu水平顯著升高(P0.05),下丘腦、海馬和前額葉皮質中的Bcl-2/Bax比值顯著降低(P0.05),血清中Bcl-2/Bax比值沒有顯著差異;與模型組比較,交泰丸組大鼠下丘腦、海馬、前額葉皮質和血清中IL-2、IL-6、BDNF、NGF、CCK-8水平顯著升高(P0.05),下丘腦、海馬、前額葉皮質和血清中GFAP、Glu水平顯著降低(P0.05),同時交泰丸組大鼠下丘腦、海馬和前額葉皮質中的Bcl-2/Bax比值顯著升高(P0.05),但血清中Bcl-2/Bax比值沒有明顯改變。結論:1.交泰丸能明顯抑制失眠大鼠自發(fā)活動。2.交泰丸干預失眠的機制可能與調節(jié)機體脂質代謝、能量代謝、氨基酸代謝、膽堿代謝和腸道菌群代謝有關。3.交泰丸干預失眠的機制可能與調節(jié)神經保護因子BDNF、NGF,凋亡相關因子Bcl-2、Bax,神經遞質Glu、CCK-8和細胞因子IL-2、IL-6水平,抑制星形膠質細胞增生活化有關。
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

10圖 2-1 實驗技術路線圖Fig 2-1 Schematic representation of experiment2.3 大鼠的自發(fā)活動實驗實驗開始前將大鼠置于干凈的飼養(yǎng)籠中提前適應 3 min，記錄各組大鼠 2 min 內自主活動時間和前肢離地舉立次數作為正�；顒臃磻笜恕Ｄ┐谓o藥后 1 h 再次測量各組大鼠上述指標[59]。

圖 2-2 交泰丸對大鼠自發(fā)活動的影響（ ±s, n=6）與模型組比較，*P<0.05。Fig 2-2 Effect of Jiao-Tai-Wan on the locomotor activity of rats ( ±s, n=6)*P<0.05 compared with the model group.3.2 大鼠的尿液樣本1H-NMR 代謝物圖譜分析3.2.1 尿液樣本1H-NMR 代謝物圖譜

【參考文獻】

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本文編號：2730263