【摘要】：研究背景和目的:由于社會逐步進入老齡化階段,與年齡相關(guān)的疾病也日漸成為社會的負擔,其中骨質(zhì)疏松是主要危害人類健康的疾病之一。近年來,骨質(zhì)疏松的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢。骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis)是一種以骨量減少,骨組織微結(jié)構(gòu)破壞,導致骨強度下降,骨脆性增加,發(fā)生以骨折為特征的全身性骨骼疾病。骨質(zhì)疏松性骨折有較大的危害性,會導致多數(shù)患者生活不能自理,生活質(zhì)量明顯下降,甚至死于各種嚴重的并發(fā)癥�，F(xiàn)有的骨質(zhì)疏松治療藥物均有一定的副作用而使其臨床應(yīng)用受到限制,尋找到高效低副作用的骨質(zhì)疏松治療藥物變成亟待解決的問題。體內(nèi)骨代謝的平衡主要是夠破骨細胞的骨吸收和成骨細胞的骨形成兩者之間的平衡,而骨質(zhì)疏松主要是由于這種平衡被打破,而且常常是由于破骨細胞形成的數(shù)量增多或者骨吸收功能增強,所以尋找有效地能夠抑制破骨細胞形成或骨吸收功能的藥物成為治療骨質(zhì)疏松的方法。在本課題中,我們前期的實驗發(fā)現(xiàn)植物提取物鞣花酸能夠抑制破骨細胞的分化,進而深入探究鞣花酸對骨質(zhì)疏松的防治作用。鞣花酸(Ellagic acid)是存在于水果中的天然酚類抗氧化劑,包括黑莓、覆盆子等植物。之前的研究報道證實了鞣花酸具有抗增生和抗氧化、抗腫瘤、抗炎以及防治紫外線等諸多作用。但是鞣花酸在骨代謝中的作用和分子機制目前尚不清楚。本課題將通過探究鞣花酸對破骨細胞的形成和骨吸功能及其分子機制,并進一步通過構(gòu)建小鼠去卵巢術(shù)后引起骨質(zhì)疏松的模型,探究鞣花酸對骨質(zhì)疏松癥小鼠模型的骨丟失的保護作用。因此,本課題將從以上這三方面來闡述鞣花酸調(diào)控破骨細胞分化和功能分子機制,為骨質(zhì)疏松以及骨溶解性疾病的藥物治療提供新的思路。實驗方法:體外實驗:通過從小鼠脛骨中提取出骨髓單核巨噬細胞(bone marrow macrophages,BMMs),利用cck8試劑盒測定鞣花酸對BMMs的增殖影響,并進一步通過TRAP染色探究鞣花酸對破骨細胞分化的影響。緊接著,在羥基磷灰石板種植破骨樣細胞,探究鞣花酸對破骨細胞骨吸收功能的影響,并進一步通過RT-PCR定量分析鞣花酸對破骨細胞成熟標志性基因的影響。最后,利用western blot探究鞣花酸對破骨細胞分子機制的影響。體內(nèi)實驗:小鼠去卵巢后(OVX)骨質(zhì)疏松模型:12周齡大雄性C57小鼠隨機分成4組,空白對照組,假手術(shù)組,OVX+鞣花酸高劑量組,OVX+鞣花酸低劑量組,4周后收集小鼠樣本,Micro-CT掃描和組織分析小鼠骨量變化,HE染色和TRAP染色觀察小鼠組織學形態(tài)情況。結(jié)果:在本次研究中,我們開始通過熒光蛋白報告基因發(fā)現(xiàn)植物提取物鞣花酸能夠抑制NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的表達。在進一步的研究中,我們發(fā)現(xiàn)鞣花酸能夠在體外實驗中抑制破骨細胞的分化和骨吸收功能,并且抑制了破骨細胞成熟標志性基因的表達。我們發(fā)現(xiàn)鞣花酸抑制破骨細胞分化是通過抑制NF-κB和NFAT信號通路。在體內(nèi)實驗中,我們發(fā)現(xiàn)鞣花酸在小鼠去卵巢術(shù)后引起的骨質(zhì)疏松模型中有著明顯的防治作用。綜上,這些結(jié)果都表明鞣花酸能夠在體內(nèi)外通過抑制破骨細胞的形成和骨吸收功能,從而對骨質(zhì)疏松有著有效的防治作用。因此,鞣花酸可能成為一種潛在治療骨質(zhì)疏松的藥物,并且可能能夠治療對其它與破骨細胞相關(guān)的骨溶解疾病。本課題的研究成果能為藥物的臨床轉(zhuǎn)化和新型產(chǎn)品研發(fā)提供理論依據(jù)。結(jié)論:鞣花酸能夠通過抑制破骨細胞的分化和骨吸收,從而保護了小鼠去卵巢后引起的骨質(zhì)疏松。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

30igure 1. EA inhibits RANKL-induced osteoclastogenesis in BMMs and osteoclast-specifxpression. (A) The cytotoxic effect of EA on BMMs at 48 hours was measured by CCsteoclastogenesis assay was used to determine the inhibitory effect of EA on the differentisteoclasts. (C) The number of TRAP (+) osteoclast-like cells were calculated. *p<0.05, ** p<0.<0.001. 1：鞣花酸抑制 RANKL 誘導的破骨細胞的形成。(A) 使用 CCK8 法測定鞣花酸對破骨前體胞毒性作用。（B）在含有 MCSF（30ng/ml）和 RANKL（50ng/ml）的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至破骨細胞成熟，利用抗酒石酸染色法對破骨細胞進行染色，在顯微鏡下觀察并計算的數(shù)量（細胞大于或等于 3 個細胞核定義為破骨細胞）。*P<0.05，**P<0.005，***P<0.00

Figure 4. The expression of osteoclast-specific gene including DC-STAMP, CTSK, V-ATPase-d2, Acp5was measured by Real-time PCR. *p<0.05, ** p<0.005, *** p<0.001.圖 4：鞣花酸抑制破骨細胞成熟標志性基因的表達。通過實時聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測破骨細胞特異性基因 DC-STAMP、CTSK、V-ATPase-D2、ACP5 的表達。*P<0.05，**P<0.005，***P<0.001。

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本文編號：2729139