【摘要】：生物堿是石斛屬植物中主要活性成分之一,現(xiàn)代藥理學研究表明,石斛生物堿具有改善大腦記憶和認知功能障礙的活性�；羯绞前不帐〉赖厮幉�、石斛類中國地理標志保護產(chǎn)品。目前對霍山石斛生物堿的研究主要停留在總生物堿含量檢測層面,開展霍山石斛生物堿組成分析及其神經(jīng)保護作用研究對于其保健功效開發(fā)具有重要指導(dǎo)意義。因此,本研究以霍山石斛鮮條為原料,采用加熱浸提、液液萃取、固相萃取純化得到三種霍山石斛生物堿(分別命名為DHALE、DHALSE-2和DHALSE-3),借助HPLC-DAD、GC-MS及LC-QTOF-MS/MS對霍山石斛生物堿樣品的組成成分進行分析,最后研究其對氧化損傷神經(jīng)細胞的預(yù)保護作用。主要研究結(jié)果如下:(1)霍山石斛總生物堿提取的最佳溶劑為酸性乙醇(70%EtOH,pH=3)。當石斛凍干粉與酸性乙醇料液比1:25,80℃水浴浸提3次,每次2 h,提取得到的總生物堿含量為0.0371%(以凍干粉計),比95%乙醇提取者增加41.06%,相對三氯甲烷提取則提高了508.19%。(2)酸水堿化液液萃取方法可對霍山石斛酸性乙醇提取液中生物堿進行有效富集及初步純化,且三種提取溶劑所得霍山石斛總生物堿組成成分類似。HPLC-DAD分析表明:經(jīng)過液液萃取后,石斛生物堿提取物液相色譜圖中0-7min中的基質(zhì)干擾峰可顯著減弱;GC-MS分析表明:液液萃取可除去石斛提取液中糖類、醚類和醇類等物質(zhì);HPLC-DAD及GC-MS分析證實三種溶劑(酸性乙醇、95%乙醇和三氯甲烷)提取的霍山石斛生物堿組成成分類似。(3)與鐵皮石斛或金釵石斛生物堿組成相比,霍山石斛生物堿組成具有特異性。使用HPLC-DAD對霍山石斛總生物堿提取物(DHALE)、金釵石斛總生物堿提取物(DNALE)和鐵皮石斛總生物堿提取物(DOALE)進行檢測,通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)對其高效液相色譜圖進行分析。結(jié)果表明:金釵石斛、鐵皮石斛與霍山石斛的生物堿組成相似度的相關(guān)系數(shù)分別為0.564和0.435,此結(jié)果說明霍山石斛生物堿組成成分與金釵石斛和鐵皮石斛相似度較低,霍山石斛具有自己的特有生物堿組成體系使用GC-MS對DHALE、DNALE和DOALE的檢測表明:霍山石斛生物堿有一種特征型生物堿為6-羥基石斛次堿,通過峰面積歸一化法計算其相對含量為58.15%。(4)霍山石斛提取物經(jīng)過液液萃取和固相萃取純化后,得到樣品DHALSE-2和DHALSE-3,LC-QTOF-MS/MS定性分析表明其主要含有6種生物堿類化合物。以PCX為吸附劑的固相萃取柱對霍山石斛生物堿提取物進行分離純化時,使用含有3%氨水的1:1甲醇/乙腈溶液為洗脫液,即可將霍山石斛生物堿完全洗脫,分別得到DHALSE-2和DHALSE-3。DHALSE-3中生物堿化合物分別為6-羥基石斛次堿(6-hydroxynobiline)、2-羥基石斛堿(2-hydroxydendrobine)、findlayine C、石斛堿(dendrobine)、石斛酮堿(nobilonine)和trans-dendrochrysanine;DHALSE-2中生物堿類分別為6-羥基石斛次堿,石斛酮堿和trans-dendrochrysanine。(5)DHALE、DHALSE-2和DHALSE-3對經(jīng)H_2O_2誘導(dǎo)氧化損傷的PC12細胞均有預(yù)保護作用,DHALSE-3的預(yù)保護效果優(yōu)于DHALE和DHALSE-2。
【學位授予單位】：合肥工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285;TQ464
【圖文】：

霍山石斛生物堿提取溶劑的篩選，提高霍山石斛總生物堿含量，這對霍山物堿后續(xù)分離純化研究具有重要意義。目前市場上僅有石斛堿一種石斛類生物堿標準品，直接對霍山石斛生物分析存在一定的難度。為此，本研究在采用 HPLC-DAD 和 GC-MS 技術(shù)對斛生物堿進行組成分析時，以生物堿含量最高的金釵石斛、擬列入藥食同皮石斛生物堿組成作為參照，初步判斷霍山石斛生物堿組成的種屬特征性。 材料與儀器.1 主要原料原料：霍山石斛鮮條：三年生，安徽霍山縣長沖中藥材開發(fā)有限公司， cm，直徑 0.3-0.7 cm；鐵皮石斛鮮條：三年生，安徽霍山縣長沖中藥材開公司，莖長 15-20 cm，直徑 0.5-0.8 cm；金釵石斛鮮條：三年生，購于貴州市旺龍鎮(zhèn)云集種植基地莖長莖長 35-45 cm，直徑 0.5-1.8 cm。將石斛切成段于-80℃下冷凍 24 h 后，真空冷凍干燥 24 h，使用中藥粉碎機粉碎，過 100 石斛鮮條凍干粉。三種石斛鮮條形態(tài)如圖 2.1 所示。

表 2.2 試驗儀器與設(shè)備（續(xù)）Tab 2.2 Test equipment and instruments名稱 型號 生產(chǎn)廠商 pH 計 PB-10 德國 Sartorius 公司干燥機 FD - 2 北京博醫(yī)康試驗儀器有限合儀 XW-80A 上海皓莊儀器有限公司光度計 UV - 2600 上海美譜達儀器有限公色譜儀 Agilent 1260 美國安捷倫公司質(zhì)聯(lián)用儀 /SCION SQ 美國布魯克公司設(shè)計與試驗方法方案設(shè)計

【參考文獻】

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2 李啟艷;朱日然;孫萍;姜國萍;;HPLC-DAD法檢測染紅中藥材中20種非法添加色素[J];醫(yī)藥導(dǎo)報;2015年05期

3 陳乃東;李俊;金暉;陳瓊;朱慶杰;;HPLC-UV-CL聯(lián)用研究霍山石斛生物堿清除自由基活性[J];食品工業(yè)科技;2015年07期

4 曹玲;王連芝;;氣相色譜法在中藥分析中的應(yīng)用[J];黑龍江科技信息;2014年30期

5 陳存武;陳乃東;孟云飛;張艷;胡建;;沉淀敲出法快速發(fā)現(xiàn)霍山產(chǎn)鐵皮石斛生物堿及其組分抗氧化活性在線測定[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2014年07期

6 陳乃東;高峰;林欣;金暉;;不同種源霍山石斛生物堿比較研究[J];中藥材;2014年06期

7 徐云燕;王令儀;黃彬;謝笑龍;吳芹;石京山;;不同生長期金釵石斛和鐵皮石斛中總生物堿及多糖的比較[J];華西藥學雜志;2014年03期

8 楊莉;袁丁;代艷文;狄國杰;張長城;劉朝奇;王婷;;竹節(jié)參總提物對H_2O_2誘導(dǎo)SH-SY5Y神經(jīng)細胞損傷的保護作用[J];第三軍醫(yī)大學學報;2014年02期

9 韋練;郭力;陳佳江;許莉;石媛慧;郝普彥;羅方利;張廷模;韓瑜;;3,5-二硝基水楊酸法測定石斛多糖含量的研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2013年06期

10 付小梅;彭水梅;羅光明;吳志瑰;裴建國;孫艷朝;;氣相色譜法新進展及其在中藥研究中的運用[J];中國現(xiàn)代中藥;2013年03期

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6 柳源;金釵石斛總生物堿對Aβ_(25-35)誘導(dǎo)的PC12細胞凋亡的保護作用及機制研究[D];遵義醫(yī)學院;2017年

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8 柴文靜;維生素C后處理對離體大鼠心臟缺血再灌注損傷的影響[D];河北醫(yī)科大學;2016年

9 劉瑞婷;基于近紅外光譜技術(shù)的石斛屬植物快速鑒別研究與應(yīng)用[D];浙江農(nóng)林大學;2015年

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本文編號：2726292