【摘要】：目的:類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)發(fā)病機制迄今未明,成纖維樣滑膜細胞(FLS)過度增殖和凋亡不足是RA發(fā)病和病情發(fā)展的重要原因,抑制FLS增殖誘導其凋亡是治療RA的一個有效策略。梔子苷為梔子的主要有效成分,具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理活性,然而梔子苷極性大,生物利用度非常低,且很難從梔子中有效的分離出來制備成單體,很大程度上限制了應用。五乙酰梔子苷((Ac)_5GP)是以梔子苷為母核進行衍生化后得到的活性化合物,其活性高于母核梔子苷,有文獻報道(Ac)_5GP有誘導腫瘤細胞凋亡作用。本研究以佐劑性關(guān)節(jié)炎(AIA)大鼠和體外分離培養(yǎng)的AIA FLS為研究對象,研究(Ac)_5GP的可能抗風濕作用及其作用機制,為RA防治提供新的思路和藥物靶標。方法:完全弗氏佐劑制備大鼠AIA模型,(Ac)_5GP(30,60,120 mg/kg)灌胃給藥。分別測定足腫脹,多關(guān)節(jié)炎指數(shù),促炎性細胞因子水平,踝關(guān)節(jié)組織學評估和蛋白多糖表達來評價(Ac)_5GP對AIA大鼠的治療作用。免疫組化Ki67和TUNEL檢測,揭示(Ac)_5GP在體內(nèi)對AIA大鼠滑膜細胞的抗增殖和促凋亡作用。體外分離培養(yǎng)AIA FLS,(Ac)_5GP(50,100,200μM)體外給藥。采用MTT法定量分析(Ac)_5GP對AIA FLS增殖的影響。采用Hoechst染色、DNA階梯檢測和流式細胞凋亡試驗評價(Ac)_5GP對AIA FLS的促凋亡作用。Western blot檢測細胞凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2、Bax和caspase 3)和NF-κB信號通路關(guān)鍵分子(IκBα、P-IκBα和NF-κB p65)的表達水平。免疫熒光分析(Ac)_5GP對AIA FLS中NF-κB核易位的影響。結(jié)果:(Ac)_5GP體內(nèi)給藥能抑制AIA大鼠繼發(fā)性足腫脹,降低多關(guān)節(jié)炎指數(shù),降低血清TNF-a和IL-1β水平,減輕踝關(guān)節(jié)病變,促進蛋白聚糖表達。(Ac)_5GP體內(nèi)給藥也能降低Ki67陽性表達率,提高滑膜組織中滑膜細胞凋亡指數(shù)。(Ac)_5GP(120 mg/kg)顯著降低Bcl-2蛋白表達,增加Bax蛋白表達,并降低Bcl-2與Bax的比值。此外,(Ac)_5GP(120 mg/kg)抑制了IκBα的降解和磷酸化,降低了核提取物中NF-κB p65的蛋白水平。在體外實驗中,(Ac)_5GP體外給藥能劑量依賴性抑制AIA FLS的增殖反應。Hoechst染色結(jié)果表明經(jīng)(Ac)_5GP處理的AIA FLS顯示典型的凋亡形態(tài)學特征。DNA ladder檢測證實(Ac)_5GP對滑膜細胞凋亡的促凋亡作用。流式細胞凋亡檢測表明(Ac)_5GP能顯著提高AIA FLS的凋亡率。與體內(nèi)結(jié)果相似,(Ac)_5GP體外給藥能降低AIA FLS中Bcl-2蛋白表達、增加Bax和caspase 3蛋白表達;(Ac)_5GP體外給藥能抑制AIA FLS中IκBα的降解和磷酸化,降低了核提取物中NF-κB p65的蛋白水平。免疫熒光分析表明(Ac)_5GP可通過抑制NF-κB p65核易位而抑制NF-κB的激活。結(jié)論:(Ac)_5GP(梔子苷活性衍生物)對AIA大鼠具有明顯的治療作用,其機制可能與抑制FLS增殖、誘導其凋亡,并抑制NF-κB通路有關(guān)。(Ac)_5GP體外給藥能明顯促進AIA FLS凋亡,該作用可能和調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達有關(guān)。(Ac)_5GP體外給藥能抑制NF-κB p65的入核進而抑制NF-κB通路的活化。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

GP 的結(jié)構(gòu)（化學式：C27H34O15；分子量：Ac)5GP (Chemical formula: C27H34O15; Mole節(jié)炎(adjuvant-induced arthritis,AIA)觀察了(Ac)5GP 對 AIA 大鼠的治療Ac)5GP 的可能抗風濕作用機制。鑒于要作用，本研究進一步探討了(Ac)5G些結(jié)果有助于闡明(Ac)5GP 在 RA 治學實驗動物中心），雄性，2～3 周齡

0.1±0.3 0.2±0.4 0.2±0.4 0.2± 4.4±1.1##6.7±1.1##8.4±1.4##9.6±0 4.2±1.4 6.0±1.4 7.6±1.3 8.5±0 4.4±0.8 5.6±1.2 6.6±1.2 7.5±20 4.1±1.4 5.5±1.4 6.3±1.3*7.0±0 4.2±1.1 5.2±1.0 6.0±0.9**6.8±表示(n=10)，##p＜0.01，與正常組相比；*p<0.05,**pSD (n=10).##p<0.01 compared with normal control groucompared with AIAcontrol group. AIA 大鼠 TNF-α和 IL-1β水平，AIA 組的血清 TNF-α和 IL-1β水平明顯高于相比，血清 TNF-α和 IL-1β水平呈劑量依賴性下IA 對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。作為陽性 TNF-α和 IL-1β的生成。

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本文編號：2725996