發(fā)布時間：2020-06-20 10:26

【摘要】：目的:本文以黃連為研究對象,采用HPLC和UV測定野生與種植黃連不同部位有效成分鹽酸小檗堿及總生物堿的含量,鹽酸小檗堿親和介質(zhì)的制備及蛋白質(zhì)SDS-PAGE垂直電泳技術(shù),通過比較分析野生與種植黃連植株不同部位生物堿的含量,分析野生與種植黃連不同部位的差異蛋白,以期建立黃連植物體中鹽酸小檗堿的生源代謝途徑,為確保優(yōu)質(zhì)藥材種植資源及質(zhì)量控制研究提供依據(jù)。方法:紫外分光光度法200-600 nm全波長掃描后采用測定波長345 nm。HPLC采用C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色譜柱,乙腈和0.4%磷酸水溶液等度洗脫,流速1.0 mL/min,進樣量10μL,檢測波長345 nm,柱溫30℃。通過制備鹽酸小檗堿親和介質(zhì)釣取其相關(guān)代謝酶,采用SDS-PAGE凝膠電泳和考馬斯亮藍法,以蛋白條帶豐度、蛋白分子的相對分子量、A_(595 nm)和每克藥材中蛋白質(zhì)含量為指標,比較水提法、Tris-HCl法、硫酸銨沉降法所得黃連蛋白的差異,并對野生與種植黃連不同部位蛋白質(zhì)的差異進行分析與評價。結(jié)果:種植黃連植株的總生物堿含量中根莖、須根和莖葉含(9.875±0.029)%、(6.406±0.033)%、(1.924±0.037)%,種植黃連植株的鹽酸小檗堿含量中根莖、須根和莖葉含(0.4505±0.0373)%、(0.1673±0.0331)%、(0.0879±0.0293)%。野生黃連植株的總生物堿含量中根莖含(7.953±0.028)%、莖葉含(0.644±0.031)%,野生黃連植株的鹽酸小檗堿含量中根莖含(0.3802±0.0323)%、莖葉含(0.1597±0.0315)%。優(yōu)選得出最佳黃連蛋白質(zhì)提取方法為Tris-HCl法,該法所提取的黃連蛋白豐度最高,且每克藥材中蛋白質(zhì)含量最高;野生與種植黃連不同部位蛋白質(zhì)的差異明顯,蛋白質(zhì)豐度及每克藥材中蛋白質(zhì)含量順序均為:種植黃連根莖野生黃連根莖種植黃連莖葉野生黃連莖葉種植黃連須根,并且聚類分析可知野生與種植黃連根莖蛋白關(guān)聯(lián)關(guān)系較為顯著,與其他部位蛋白關(guān)聯(lián)不顯著。結(jié)論:野生與種植黃連植株不同部位的生物堿含量存在明顯差異,在種植黃連植株根莖的鹽酸小檗堿和總生物堿含量均明顯高于其須根和莖葉部位的;在野生黃連植株根莖的含量也遠高于其莖葉部位的;種植黃連根莖高于野生黃連根莖。就總生物堿的含量而言,種植黃連根莖的含量最高,質(zhì)量最佳。本研究優(yōu)選的Tris-HCl法可以充分提取黃連中的蛋白質(zhì);野生與種植的黃連根莖的蛋白明顯高于其他部位,且種植6年生的黃連根莖蛋白含量高于野生未知年限黃連根莖。黃連不同部位蛋白質(zhì)的差異性既為其初級次級代謝成分及代謝途徑研究奠定基礎(chǔ),也為黃連藥材種質(zhì)資源研究及質(zhì)量控制評價提供依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284.1
【圖文】：

圖 2-1 三種方法的 SDS-PAGE 蛋白電泳圖Figure 2-1 Electrophoresis of SDS-PAGE protein in three methods清白蛋白標準曲線的繪制所得牛血清白蛋白標準曲線見圖 2-2，牛血清白蛋白標準曲線方82·C+0.01648，r=0.9991。

25-2 牛血清白蛋白標準曲線的繪制（a：1 號管 700-500nm 波長掃描；b：牛血清白蛋白標準re 2-2 bovine serum albumin standard curve drawing (a: 1 tube 700-500 nm wavelength scabovine serum albumin standard curve)提取方法的蛋白質(zhì)含量提法、Tris-HCl 法、硫酸銨沉降法的考馬斯亮藍法測定的蛋白質(zhì)含量見表

【參考文獻】

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本文編號：2722288