【摘要】：甲狀腺癌屬于內(nèi)分泌惡性腫瘤,近幾年的發(fā)病率不斷上升,其中乳頭狀甲狀腺癌的發(fā)病率最高。盡管有多種手段治療甲狀腺癌,但仍存在復發(fā)、轉(zhuǎn)移、惡化等風險,有些治療還會帶來副作用。多酚類物質(zhì)具有一定的抗腫瘤活性,并且作為天然化合物的代表具有來源廣、毒性低、作用靶點多樣等優(yōu)勢。石榴中提取的安石榴苷屬于多酚中的大分子物質(zhì),其抗腫瘤功效已經(jīng)引起科學家的關(guān)注。然而安石榴苷在甲狀腺癌中的作用機制尚未明晰。本論文主要探究安石榴苷對乳頭狀甲狀腺癌BCPAP細胞的抑制作用和相關(guān)機理,為安石榴苷在甲狀腺癌治療方面的應用提供科學依據(jù),同時探索新的治療靶點。本課題首先探討安石榴苷對BCPAP細胞的毒性作用。SRB和MTT檢測結(jié)果顯示安石榴苷以劑量依賴和時間依賴方式抑制BCPAP細胞存活,并且與正常甲狀腺細胞Nthy-ori 3-1相比,安石榴苷對BCPAP細胞的抑制效應更顯著。臺盼藍以及PI染色結(jié)果顯示,安石榴苷破壞了BCPAP細胞膜的完整性,且具有濃度依賴性。在此基礎(chǔ)上,我們探討安石榴苷誘導BCPAP細胞死亡的途徑。PI/Hoechst 33342雙染以及western blot檢測結(jié)果顯示安石榴苷未引起細胞凋亡。AO染色以及自噬相關(guān)蛋白的檢測結(jié)果顯示安石榴苷誘導了細胞自噬。聯(lián)用安石榴苷與自噬抑制劑3-MA、Baf A1后,我們發(fā)現(xiàn)安石榴苷促進了細胞內(nèi)自噬流。MTT結(jié)果顯示3-MA顯著地逆轉(zhuǎn)了安石榴苷誘導的細胞死亡效應。Western blot檢測結(jié)果進一步說明安石榴苷可能通過正調(diào)控ERK與p38通路和負調(diào)控mTOR通路來誘導自噬,進而促進BCPAP細胞死亡。第三部分探討安石榴苷對BCPAP細胞DNA損傷的影響及相關(guān)機制。結(jié)果顯示安石榴苷促進DNA損傷標志物H2A.X的磷酸化,引起細胞DNA斷裂,但不引起DNA構(gòu)象改變,而且對DNA損傷的誘導不依賴活性氧簇的產(chǎn)生。安石榴苷還促進DNA損傷應答相關(guān)蛋白ATM的磷酸化,然而對ATR的磷酸化無明顯影響。ATM抑制劑KU-55933能逆轉(zhuǎn)安石榴苷對BCPAP細胞存活率的抑制作用,說明ATM參與介導安石榴苷誘導的BCPAP細胞死亡。最后部分探究安石榴苷對BCPAP細胞衰老的影響及相關(guān)機制。細胞粒徑測定及粒度分析、β-半乳糖苷酶活性檢測、細胞周期及相關(guān)蛋白水平檢測等結(jié)果表明,安石榴苷可誘導細胞衰老,且具有劑量依賴效應。通過分析衰老相關(guān)分泌表型IL-8,IL-6,IL-1β的mRNA水平,我們發(fā)現(xiàn)安石榴苷無法誘導IL-8表達,但可明顯上調(diào)IL-6和IL-1β的表達水平,且具有濃度依賴性。此外,安石榴苷無法誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(以毒胡蘿卜素為陽性對照藥物)。進一步的研究顯示安石榴苷激活了NF-κB通路,并通過該通路正調(diào)控IL-6和IL-1β的表達。NF-κB還參與介導安石榴苷誘導的BCPAP細胞衰老和死亡。綜上所述,本研究證明了安石榴苷通過誘導細胞發(fā)生自噬性死亡以及DNA損傷和細胞衰老來抑制乳頭狀甲狀腺癌BCPAP細胞的生長存活,其中涉及到MAPK,mTOR,ATM,NF-κB等通路。安石榴苷有望成為治療甲狀腺癌的新興藥物。
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285
【圖文】：

它的化學分子式為 C48H28O30，相對分子質(zhì)量達到9]。安石榴苷具有多個親水性羥基，因而有著良好的水溶解性，可被水解為石榴皮鞣素和鞣花酸，石榴皮鞣素又進沒食子酸[11]。安石榴苷還可溶于甲醇等有機溶劑[12]。在酸下，安石榴苷的穩(wěn)定性較差，易降解為鞣花酸等物質(zhì)[13]。包括安石榴苷在內(nèi)的鞣花單寧類物質(zhì)既可被直接吸收至過腸道微生物的生物轉(zhuǎn)化作用變?yōu)榛钚源x物而被間接的皮中所含安石榴苷的量不盡相同，范圍在 39.8 ~121.5 m mg/g[15]。安石榴苷目前僅能通過天然提取的方式獲得。

3 結(jié)果與討論榴苷對乳頭狀甲狀腺癌BCPAP細胞的毒性研究榴苷對甲狀腺癌 BCPAP 細胞的抑制作用定安石榴苷對 BCPAP 細胞的抑制作用，我們用不同濃度安石榴）刺激 BCPAP 細胞 24 h（另設 SC 對照）后，先鏡像觀察，從細析其存活情況。圖 3-1 顯示，與 SC 相比，隨著安石榴苷作用濃顯減少，說明細胞的生長受到抑制，高濃度組（50，100 μmol/L

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本文編號：2718275