【摘要】：目的:研究紅花蜂花粉多糖組分Ⅰ(PBPC I)的體內(nèi)抑瘤作用與作用機(jī)制。方法:以紅花蜂花粉為原料,利用水提醇沉法提取總多糖,脫蛋白后,通過DEAE—52纖維素柱層析分離,Saphadex-G75柱層析純化,得到PBPCⅠ。將60只BALB/c雌性小鼠隨機(jī)分為6組,正常對(duì)照組、腫瘤模型組、環(huán)磷酰胺(CTX)組以及PBPCⅠ低、中、高劑量組,每組10只。除正常對(duì)照組外,其余各組均在小鼠的右前肢腋窩皮下各注射細(xì)胞密度為1 × 10~7個(gè)/ml的0.2ml H22肝癌細(xì)胞,建立H22肝癌腫瘤模型。PBPCⅠ低、中、高劑量組每天分別灌胃給予 PBPCⅠ 100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg,CTX 組每天皮下注射 CTX 30mg/kg。正常對(duì)照組與腫瘤模型組每天灌胃給予等容積的生理鹽水,連續(xù)15天。末次給藥后,各組小鼠禁食不禁水12h,摘眼取血,分離血清,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法鋇測(cè)血清中 IL-1α、IL-6、IFN-γ、TNF-κ、IL-2、VEGF含量。小鼠稱體質(zhì)量后,脫頸處死,剝離瘤塊,取脾臟及胸腺,分別稱質(zhì)量,計(jì)算抑瘤率與免疫器官指數(shù)。HE染色法分別觀察各組的細(xì)胞形態(tài)變化。通過實(shí)時(shí)定量PCR(RT-qPCR)實(shí)驗(yàn)觀察bax、p53、c-myc、bcl-2基因的相對(duì)表達(dá)量;蛋白質(zhì)印跡(Westemblot)實(shí)驗(yàn)測(cè)定Bax、P53、C-myc、Bcl-2的蛋白表達(dá)量。結(jié)果:與腫瘤模型組相比,CTX組和PBPC I低、中、高劑量組對(duì)小鼠H22肝癌的抑瘤率分別為67.93%、33.48%、45.69%、57.86%,差異顯著。同時(shí)PBPCⅠ低、中、高劑量組還能顯著提高荷瘤小鼠體質(zhì)量、免疫器官指數(shù),并明顯升高荷瘤小鼠血清中IFN-γ、IL-2、TNF-a水平,降低血清IL-1a、IL-6、VEGF水平。HE染色結(jié)果示,隨著PBPC I劑量的升高,腫瘤組織疏松,細(xì)胞減少,核濃縮、核碎裂、核分裂的一些凋亡特征。RT-qPCR實(shí)驗(yàn)表明PBPC I各劑量組均能下調(diào)c-myc、bcl-2基因轉(zhuǎn)錄,并上調(diào)bax、p53基因轉(zhuǎn)錄。同時(shí)Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí),PBPC I低、中、高各劑量組均可使腫瘤組織的Bcl-2、C-myc蛋白表達(dá)量降低,使Bax、P53蛋白的表達(dá)量升高。結(jié)論:PBPCⅠ對(duì)H22荷瘤小鼠具有明顯的抑瘤作用,其作用機(jī)制可能通過保護(hù)免疫器官、調(diào)控免疫因子與VEGF水平,調(diào)節(jié)Bcl-2、C-myc、Bax、P53表達(dá)水平而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制腫瘤的分裂增殖與生長。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

PBPCⅠ對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤生長的影響

圖 2.2 各組 H22 荷瘤小鼠組織 HE 染色的結(jié)果：Low，100mg/kg、Middle，200mg/kg、 High，400mg/kg 、Control 與 Model，0.1ml/10g NaCl、 CTX30mg/kg

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2713485