加減三甲散對肝纖維化大鼠肝組織microRNAs表達的影響

發(fā)布時間：2020-06-12 08:54

【摘要】：目的:觀察基于“主客交”理論的加減三甲散對由四氯化碳(CCl_4)誘導的肝纖維化大鼠模型的療效,研究該方對大鼠肝組織microRNAs表達的影響,并從基因水平探索該方抗肝纖維化的分子機制。方法:清潔級雄性Wistar大鼠30只,隨機分為正常組、模型組、加減三甲散組,每組10只。常規(guī)飼養(yǎng)7日后,對模型組、加減三甲散組采用CCl_4皮下注射復制肝纖維化動物模型。加減三甲散組自CCl_4皮下注射之日起,即給予相應(yīng)的藥物灌胃,給藥劑量分別按0.1mL/100g體質(zhì)量給予相應(yīng)藥物灌胃,每日1次。正常組和模型組予等容積蒸餾水灌胃,每日1次。均共給藥8周。治療56日后麻醉處死,每只大鼠切取2塊肝組織,分別用于HE、MASSON染色觀察病理形態(tài),及使用microRNA高通量測序技術(shù)進行microRNAs測序。結(jié)果:1.光鏡下,正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細胞未見變性及壞死,無明顯纖維結(jié)締組織增生;模型組大鼠肝細胞腫脹,出現(xiàn)脂肪或氣球樣變,大量纖維組織出現(xiàn)在中央靜脈至匯管區(qū),有假小葉形成;加減三甲散組大鼠肝細胞輕度腫脹,排列紊亂,少量纖維組織增生。與正常組比較,模型組、加減三甲散組大鼠肝組織炎癥活動度分級和纖維化程度分期及膠原纖維面積百分比均明顯升高(P0.05);與模型組比較,加減三甲散組肝組織炎癥活動度分級和纖維化程度分期及膠原纖維面積百分比均明顯降低(P0.05)。2.從差異倍數(shù)(fold change1)和顯著水平(P0.05)對差異表達的microRNAs進行篩選。在模型組與正常組比較中,共有37個差異表達的microRNAs,其中29個表達上調(diào),8個表達下調(diào);在加減三甲散組與正常組比較中,共有100個差異表達的microRNAs,其中80個表達上調(diào),20個表達下調(diào)。同時,取正常較模型組與模型組較加減三甲散組差異表達microRNAs的交集,篩選出14個差異表達的microRNAs。結(jié)論:1.采用CCl_4皮下注射法可成功復制大鼠肝纖維化模型。2.加減三甲散可在一定程度上改善肝纖維化模型大鼠病理形態(tài)。3.采用microRNA高通量測序技術(shù)檢測并篩選出的部分差異表達microRNAs,可能通過交互作用共同體現(xiàn)加減三甲散抗肝纖維化作用及“主客交”理論的部分內(nèi)涵。4.加減三甲散可能通過miR-146b-5p、miR-125b-5p、miR-200b-3p調(diào)控相應(yīng)的功能或通路發(fā)揮抗肝纖維化作用。
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