【摘要】：目的:通過(guò)觀察丁氏潰結(jié)口服方治療潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠的腸道炎癥的情況,評(píng)估丁氏潰結(jié)口服方的療效,并運(yùn)用western-blot的手段證實(shí)其對(duì)UC的治療作用可能是通過(guò)下調(diào)IL-6、IL-17以及TNF-α的水平來(lái)實(shí)現(xiàn)的。材料與方法:1.檢索中科院上海有機(jī)化物研究所中藥與化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)(http://www.organchem.csdb.cn)、中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(http://tcmspnw.com),收集丁氏潰結(jié)口服方中已被報(bào)道的化學(xué)成分。運(yùn)用ADME/Tox虛擬計(jì)算系統(tǒng)篩選丁氏潰結(jié)口服方中的潛在活性成分。運(yùn)用藥效團(tuán)模型,虛擬預(yù)測(cè)丁氏潰結(jié)口服方中各活性成分的潛在作用靶點(diǎn)。將多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索結(jié)果予以整合,收集和UC發(fā)生、發(fā)展及治療相關(guān)的靶點(diǎn)。將丁氏潰結(jié)口服方的潛在作用靶點(diǎn)和UC的發(fā)生、發(fā)展及治療的靶點(diǎn)做PPI,構(gòu)建兩者間的相互作用網(wǎng)絡(luò),篩選出有顯著性意義的靶點(diǎn),再?gòu)闹泻Y選出丁氏潰結(jié)口服方治療UC的潛在作用靶點(diǎn)。2.將40只C57BL/6J小鼠,性別雌性,隨機(jī)分為空白組,模型組,美沙拉秦組,丁氏潰結(jié)口服方低劑量組以及丁氏潰結(jié)口服方高劑量組共5組,每組8只。除空白組外,其余幾組分別予3.5%DSS液體喂養(yǎng)7天復(fù)制UC小鼠急性期UC的模型。復(fù)制成功后,空白組予自由飲用礦泉水,其余組別分別予生理鹽水、美沙拉秦以及低劑量潰結(jié)口服方和高劑量潰結(jié)口服方灌胃治療14天。期間觀察小鼠的一般狀態(tài)。第14天結(jié)束后,處死全部小鼠,觀察腸黏膜形態(tài),評(píng)估結(jié)腸黏膜組織學(xué)評(píng)分。使用Western-Blot法測(cè)量小鼠結(jié)腸黏膜中的TNF-α、IL-6以及IL-17的含量,驗(yàn)證丁氏潰結(jié)口服方在改善腸道炎癥方面的機(jī)制。結(jié)果:1.運(yùn)用ADME/TOX虛擬計(jì)算系統(tǒng)共篩選175種潛在的活性成分。其中有13種沒(méi)有找到相應(yīng)的作用靶點(diǎn),構(gòu)建出成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。將丁氏潰結(jié)口服方的潛在作用靶點(diǎn)和已知的潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)靶點(diǎn)分別做PPI,構(gòu)建相關(guān)聯(lián)系的網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析,結(jié)果顯示丁氏潰結(jié)口服方治療UC的潛在相應(yīng)靶點(diǎn)與IL-6、IL-17以及TNF-α蛋白及相關(guān)信號(hào)通路密切相關(guān)。2.UC模型復(fù)制成功后,小鼠精神不振、重量減輕、腹瀉伴有黏液膿血便。與空白組相比較,DAI評(píng)分增高(P0.05)。治療后,美沙拉秦組以及丁氏潰結(jié)口服方組小鼠炎癥好轉(zhuǎn),DAI評(píng)分比模型組低(P0.05)。丁氏潰結(jié)口服方低劑量組,治療情況較西藥組以及中藥高劑量組而言,相對(duì)較差,但優(yōu)于模型組。3.通過(guò)肉眼觀察,模型組小鼠結(jié)腸黏膜可見(jiàn)不同程度的損傷、水腫、充血及潰瘍糜爛形成,其評(píng)分高于空白組(P0.05)。丁氏潰結(jié)口服方組及西藥組小鼠組織破壞后有所恢復(fù),可見(jiàn)充血、水腫以及少許的糜爛,并未有典型的潰瘍形成。大體評(píng)分與模型組相比較低(P0.05)。4.鏡下觀察各組小鼠結(jié)腸黏膜,可見(jiàn)模型組小鼠結(jié)腸黏膜腺體結(jié)構(gòu)破壞明顯,排列稀疏,炎性細(xì)胞大量浸潤(rùn),充血水腫情況比較嚴(yán)重;丁氏潰結(jié)口服方組及美沙拉秦組黏膜未見(jiàn)明顯潰瘍,可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。5.相比空白組,模型組小鼠TNF-α、IL-6、IL-17表達(dá)水平均升高(P0.01),與模型組相比,美沙拉秦組和丁氏潰結(jié)口服方高劑量組能明顯減少TNF-α、IL-6表達(dá)水平(P0.01),丁氏潰結(jié)口服方低劑量組能減少TNF-α的表達(dá)水平(P0.05);和模型組相比,丁氏潰結(jié)口服方高劑量組在減少I(mǎi)L-17表達(dá)水平方面效果最好(P0.01),潰結(jié)口服方低劑量組和美沙拉秦組在減少I(mǎi)L-17表達(dá)水平方面具有很好的效果(P0.05)。結(jié)論:1.丁氏潰結(jié)口服方治療UC的作用機(jī)制可能是通過(guò)丁氏潰結(jié)口服方中的多藥效成分作用于各自相關(guān)靶點(diǎn)通過(guò)成分-靶點(diǎn)間的協(xié)同整合而最終起到降低血液中TNF-α、IL-6以及IL-17等細(xì)胞因子的作用從而起到治療UC的目的。2.丁氏潰結(jié)口服方對(duì)通過(guò)DSS復(fù)制的UC模型小鼠具有改善癥狀的效果,對(duì)小鼠便溏、黏液膿血便以及重量減輕的情況有所改善,從而達(dá)到減輕結(jié)腸組織的病變的效果,使小鼠一般情況以及黏膜情況、病理表現(xiàn)有較大的改善。3.經(jīng)DSS誘導(dǎo)的UC模型小鼠,丁氏潰結(jié)口服方可以從下調(diào)TNF-α、IL-6及IL-17的表達(dá)水平來(lái)減輕腸道的炎癥損傷。
【圖文】：

4 MOL000006 luteolin 36.16 0.25 MOL000098 quercetin 46.43 0.21.2 虛擬預(yù)測(cè)潰結(jié)口服方中的潛在的藥效分子靶標(biāo)，構(gòu)建“C-T”network運(yùn)用藥效團(tuán)模型，基于支持向量機(jī)（SVM）算法和隨機(jī)森林（RF）算法計(jì)算出各分跟其相對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)間的相互作用強(qiáng)度，以 SVM≥0.8，RF≥0.7 為作篩選條件，虛擬測(cè)丁氏潰結(jié)口服方中的各種活性成分的潛在作用靶點(diǎn)。在篩選的 175 種活性成分中有種成分沒(méi)有找到相應(yīng)的靶點(diǎn)；其余成分都通過(guò)有效方法預(yù)測(cè)出了各自的潛在作用靶盡管組方中藥各自具有不同的靶點(diǎn)，，但其中有很多靶點(diǎn)是多種組方中藥所共有的，這在一定程度上提示了丁氏潰結(jié)口服方中各中藥之間的協(xié)同整合效應(yīng)。進(jìn)一步構(gòu)建成靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)，即“C-T” network，課題組及本人經(jīng)過(guò)初步篩選，結(jié)果如下圖“C-T” network（圖 2-1）。其中成分的 degrees 大于平均值，提示了組方中藥中大數(shù)成分可以通過(guò)“多靶點(diǎn)”的作用模式來(lái)實(shí)現(xiàn)復(fù)方整合作用的最終效應(yīng)。

Cytoscape 軟件的插件 Bisogenet，并選擇 InAct（www.ebi.ac.uk/inotein Reference Database（http://www.hprd.org/）、Molecular ine （http://mint.bio.uniroma2.it/mint/download.do）等 6 個(gè) PPI結(jié)口服方的潛在作用靶點(diǎn)和已知的 UC 相關(guān)靶點(diǎn)分別做 PPI，構(gòu)建相互作用網(wǎng)絡(luò)中“degree”值大于平均值的節(jié)點(diǎn)定義為有顯著性意義的靶ytoscape 軟件的插件 CytoNAC，計(jì)算顯著性作用靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)每entrality (DC)、Betweenness centrality (BC)、Closeness centralictor centrality (EC)、Network centrality (NC)、和 Local avertivity (LAC)六大拓?fù)鋮?shù)，從而分析其在相互作用網(wǎng)絡(luò)中的拓?fù)渲負(fù)鋮?shù)值大于2倍平均值的靶點(diǎn)作為丁氏潰結(jié)口服方治療UC的潛在IL-17 以及 TNF-α蛋白及相關(guān)信號(hào)通路密切相關(guān)（圖 2-2）。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2708451