【摘要】：目的從神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)中下丘腦-垂體-性腺(HPG)軸的角度探討六味地黃湯及其三個(gè)“一補(bǔ)一瀉”藥對(duì)滋補(bǔ)腎陰的作用及其機(jī)制,并比較六味地黃湯及其補(bǔ)腎作用有效的“一補(bǔ)一瀉”藥對(duì)中所含主要成分的含量,從而明確該方的補(bǔ)腎作用及其機(jī)制、藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和組方原理。方法將60只小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、腎陰虛模型組、六味地黃湯組、山茱萸-牡丹皮組、熟地黃-澤瀉組、山藥-茯苓組共6個(gè)實(shí)驗(yàn)組;連續(xù)9 d分別灌胃給予以上對(duì)應(yīng)藥物;第6-9 d,除空白對(duì)照組灌胃蒸餾水外,其他各組采用糖皮質(zhì)激素法按50 mg/kg體重每天灌胃氫化可的松建立腎陰虛模型,觀察各組小鼠的一般體征,并測(cè)定其體重變化;給藥9 d后,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定小鼠血漿環(huán)磷酸腺苷(c AMP)、環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(c GMP)的含量;采用放射免疫分析法測(cè)定小鼠HPG軸中血清促卵泡素(FSH)、雌二醇(E2)及睪酮(T)的含量,計(jì)算各組小鼠子宮及睪丸指數(shù),并采用HE染色法觀察子宮及睪丸的病理組織形態(tài)學(xué)改變。采用高效液相色譜法測(cè)定六味地黃湯及其補(bǔ)腎作用有效“一補(bǔ)一瀉”藥對(duì)(山茱萸-牡丹皮)所含獐牙菜苷、芍藥苷和馬錢苷的含量,色譜條件為Hypersile C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水(24:76),檢測(cè)波長(zhǎng)236 nm,體積流量1.0 m L/min,柱溫30℃。結(jié)果1、與空白對(duì)照組比較,腎陰虛模型組小鼠體重下降(P0.01),血漿c AMP含量升高,血漿c GMP含量降低,HPG軸中血清FSH、E2、T含量降低(P0.01)。2、與腎陰虛模型組比較,六味地黃湯組可升高腎陰虛模型小鼠體重,降低血漿c AMP含量,升高血漿c GMP含量,上調(diào)HPG軸中血清FSH、E2、T水平(P0.05或0.01),并使子宮及睪丸指數(shù)升高(P0.05),可修復(fù)受損的子宮及睪丸組織。3、與腎陰虛模型組比較,山茱萸-牡丹皮組能降低腎陰虛模型小鼠血漿c AMP含量,上調(diào)HPG軸中血清FSH、E2、T水平(P0.05或P0.01),并可修復(fù)受損的子宮及睪丸組織。4、山茱萸-牡丹皮藥對(duì)中含有獐牙菜苷、芍藥苷和馬錢苷,其濃度分別在0.10μg~1.65μg(r=0.9995),0.12μg~1.92μg(r=0.9991),0.23μg~3.36μg(r=0.9997)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率分別為102.29%,100.99%,102.48%,RSD值分別為1.48%,1.32%,0.75%,按生藥量計(jì)其含量分別為0.050%,0.097%,0.364%,六味地黃湯中所含上述各成分的含量分別為0.081%,0.104%和0.363%。結(jié)論1、50 mg/kg氫化可的松注射液連續(xù)灌胃4d后,可建立良好的腎陰虛小鼠模型,其中血漿c AMP以及血清FSH、E2、T含量均可作為評(píng)價(jià)糖皮質(zhì)激素法建立腎陰虛模型的重要指標(biāo)。2、六味地黃湯改善腎陰虛的作用機(jī)制可能與其降低血漿c AMP含量,升高血漿c GMP含量,上調(diào)HPG軸中FSH、E2、T的含量,升高子宮及睪丸指數(shù),修復(fù)受損子宮及睪丸組織有關(guān)。該方中的山茱萸-牡丹皮藥對(duì)及其中所含的獐牙菜苷、芍藥苷和馬錢苷可能是六味地黃湯改善腎陰虛的主要有效藥對(duì)和藥效成分。
【圖文】：

陰虛模型小鼠一般體征的影響對(duì)照組小鼠活動(dòng)靈敏、毛發(fā)有光澤、大便質(zhì)硬且呈黃褐色；腎陰虛模型 1靡、略有拱背、毛發(fā)無(wú)光澤；腎陰虛模型 2 組小鼠萎靡不振、拱背、扎堆干枯無(wú)光澤、豎毛、大便干結(jié)；腎陰虛模型 3 組小鼠整體狀態(tài)不佳，，有精、毛發(fā)脫落嚴(yán)重等現(xiàn)象，并有小鼠死亡。陰虛模型小鼠體重的影響白對(duì)照組比較，腎陰虛模型 1、2、3 組小鼠體重均有顯著性差異（P< 0.提示：腎陰虛模型小鼠灌胃不同劑量氫化可的松后體重均有下降。結(jié)果見(jiàn)

圖 2 對(duì)腎陰虛模型小鼠血漿 cAMP、cGMP 的影響（x±s）注：與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01。源性糖皮質(zhì)激素早期可使機(jī)體表現(xiàn)出煩躁多動(dòng)、易激惹等腺皮質(zhì)激素可抑制促腎上腺皮質(zhì)激素的釋放，從而減少類固現(xiàn)一系列“耗竭”的現(xiàn)象[28]。目前腎陰虛的造模方法大多采干預(yù)，但前期研究發(fā)現(xiàn)，小鼠經(jīng)皮下或肌肉注射氫化可的松率太高，所以改用灌胃給藥以減小刺激性，該方法操作簡(jiǎn)單虛模型。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用不同劑量的氫化可的松灌胃征較空白對(duì)照組變化不明顯，腎陰虛模型 2、3 組小鼠出現(xiàn)發(fā)抖、拱背、扎堆、毛發(fā)干枯無(wú)光澤、豎毛、大便干結(jié)等現(xiàn)陰虛模型體征相符[29]。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2707192