【摘要】：目的:建立基于超高效液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用(UHPLC-Q/TOF-MS)技術(shù)的擬靶標(biāo)細(xì)胞代謝組學(xué)方法,并將建立的方法用于雷公藤甲素誘導(dǎo)HepG2和L02的細(xì)胞毒性作用研究。方法:以雷公藤甲素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞為研究載體,建立擬靶標(biāo)代謝組學(xué)方法:采用Luna Omega 1.6μPolar C_(18)(100×2.1mm)色譜柱,ESI源正、負(fù)離子模式檢測(cè),首先對(duì)樣本進(jìn)行非靶標(biāo)全掃描分析,再針對(duì)發(fā)現(xiàn)的差異代謝物進(jìn)行目標(biāo)性擬靶標(biāo)代謝組學(xué)。采用建立的方法,分別對(duì)雷公藤甲素誘導(dǎo)不同時(shí)間的HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞進(jìn)行代謝組學(xué)分析,通過(guò)PCA、OPLS-DA等方法篩選差異代謝物,結(jié)合HMDB、METLIN等在線(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定差異代謝物,采用MetaboAnalyst 4.0和KEGG對(duì)差異代謝物進(jìn)行通路分析,根據(jù)K-Means聚類(lèi)分析結(jié)合支持向量機(jī)分類(lèi)方法和Pearson相關(guān)分析篩選雷公藤甲素對(duì)兩種細(xì)胞的毒性作用生物標(biāo)志物。結(jié)果:與常規(guī)分析方法相比,對(duì)于雷公藤甲素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞前后鑒定的差異代謝物種類(lèi),擬靶標(biāo)代謝組學(xué)方法增加7個(gè),新發(fā)現(xiàn)16個(gè),校正2個(gè);對(duì)于作用通路研究,擬靶標(biāo)代謝組學(xué)方法新發(fā)現(xiàn)丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝通路,且三羧酸循環(huán)和鞘脂代謝的通路貢獻(xiàn)率提高。雷公藤甲素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞不同時(shí)間代謝組學(xué)研究共鑒定出140個(gè)差異代謝物,篩選出5個(gè)潛在生物標(biāo)志物,主要涉及氨基糖和核苷酸糖代謝、淀粉和蔗糖代謝,甘油磷脂代謝,嘌呤代謝和精氨酸、鳥(niǎo)氨酸代謝等。雷公藤甲素誘導(dǎo)L02細(xì)胞不同時(shí)間代謝組學(xué)研究共鑒定出82個(gè)差異代謝物,篩選出10個(gè)潛在生物標(biāo)志物,主要涉及嘌呤代謝,谷胱甘肽代謝,甘油磷脂代謝,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝等。兩種細(xì)胞代謝組學(xué)研究結(jié)果具有顯著差異,相同差異代謝物17個(gè),不同差異代謝物205個(gè),脂質(zhì)為顯著差異成分,谷胱甘肽為共有潛在生物標(biāo)志物,涉及不同代謝通路7條,相同代謝通路2條。結(jié)論:本研究成功建立了UHPLC-Q/TOF-MS擬靶標(biāo)代謝組學(xué)方法,該方法可豐富差異代謝物鑒定的種類(lèi),提高鑒定準(zhǔn)確度,有利于作用通路研究。雷公藤甲素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞均與嘌呤代謝和甘油磷脂代謝有關(guān),但涉及的代謝通路差異顯著,說(shuō)明雷公藤甲素對(duì)HepG2細(xì)胞和L02細(xì)胞毒性作用存在差別,提示藥物肝毒性研究細(xì)胞選擇的重要性。
【圖文】：

擬靶標(biāo)代謝組學(xué)方法的數(shù)據(jù)采集和處理流程圖

CCK-8測(cè)定不同濃度的雷公藤甲素對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制率影響
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2705625