發(fā)布時間：2020-06-08 04:05

【摘要】：目的:研究冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細胞增殖的抑制作用以及誘導DNA損傷的影響,探求冬凌草甲素是否能夠誘導胃癌SGC-7901細胞發(fā)生自噬。方法:(1)MTT法及結晶紫法檢測冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細胞的增殖活性的影響。(2)流式細胞術檢測冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細胞周期的影響。(3)吖啶橙法檢測自噬酸性囊泡。(4)Western blot檢測DNA損傷相關蛋白γH2AX(S139)、phospho-ATM(S1981)、phospho-P53(S15)、phospho-CHK2(T68)、phospho-cdc2(Y15)、phospho-cdc25c(S216)以及自噬相關蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1表達量的變化。(5)細胞免疫熒光實驗檢測冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細胞DNA損傷相關蛋白phospho-ATM(S1981)和γ-H2AX(S139)焦點形成的影響。結果:(1)MTT結果顯示不同濃度冬凌草甲素對胃癌SGC-7901細胞均有不同程度的抑制作用,其抑制作用具有濃度依賴關系.(2)結晶紫染色結果顯示隨藥物濃度增高,細胞密度逐漸減小,顯示OD值逐漸減小。(3)流式細胞術結果顯示隨著藥物濃度的升高,G0/G1期細胞逐漸減少,G2/M期細胞逐漸增多,在40μM達到阻滯最高峰,表現(xiàn)為G2/M期阻滯。(4)吖啶橙檢測自噬結果顯示酸性自噬囊泡的數(shù)量呈濃度依賴性增高。(5)Western blot結果顯示DNA損傷相關蛋白γH2AX(S139)、phospho-ATM(S1981)、phospho-P53(S15)、phospho-CHK2(T68)、phospho-cdc2(Y15)、phospho-cdc25c(S216)蛋白水平呈濃度依賴性增高,自噬相關蛋白LC3-Ⅰ蛋白水平呈劑量依賴性減少、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平呈濃度依賴性增多、LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比例減小;(6)免疫熒光結果發(fā)現(xiàn)phospho-ATM(S1981)、γH2AX(S139)焦點共定位,而且隨著藥物濃度增大而增多。結論:(1)冬凌草甲素可以抑制胃癌SGC-7901細胞增殖,通過“ATM-CHK2-Cdc2”通路誘導G2/M期阻滯,并且誘導DNA損傷,但DNA損傷信號通路具體機制有待進一步探索。(2)此外,冬凌草甲素能夠誘導胃癌SGC-7901細胞自噬,自噬相關蛋白LC3-Ⅱ、Beclin1水平隨藥物濃度增高而增加。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2702516