發(fā)布時(shí)間：2020-06-07 03:10

【摘要】：鹿角盤是馬鹿或梅花鹿在鹿茸鋸掉之后,余留在鹿角上剩余鹿茸的骨化物質(zhì),在每年春天新鹿茸長出之前自行脫落,形狀似盤子,所以稱為“鹿角盤”,是鹿角膠和鹿角霜的主要原料。鹿角盤是鹿茸的副產(chǎn)品,近些年來,人們對(duì)鹿角盤生物活性的研究越來越關(guān)注,但是鹿角盤蛋白質(zhì)類資源尚未能完全體現(xiàn)其藥用價(jià)值。蛋白質(zhì)及多肽在生命活動(dòng)中具有相當(dāng)重要的作用,鹿角盤主要的藥理功效成分為其中含有的接近40%的粗蛋白,但是,大量研究證實(shí)蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)部分是以小分子多肽的形式被吸收。所以,本課題以從鹿角盤中提取具有生物活性的多肽及膠原肽為切入點(diǎn),并且對(duì)其抑制人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖活性進(jìn)行初步研究,旨在提高鹿角盤的利用率,彰顯鹿角盤的藥用價(jià)值,對(duì)鹿角盤這一寶貴中藥的進(jìn)一步研究以及開發(fā)利用具有指導(dǎo)性的意義。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:本實(shí)驗(yàn)以鹿角盤粉末為原料,利用弱酸性緩沖鹽溶液與超聲波輔助技術(shù)相結(jié)合進(jìn)行提取,Sephadex G-25分子篩層析除鹽,Sephadex G-50分子篩層析后得到鹿角盤多肽;另一方面利用100℃熱水浴4次提取、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶復(fù)合酶酶解等方法,最終得到鹿角盤膠原肽,利用二甲酸喹啉法、Tricine-SDS-PAGE電泳、質(zhì)譜法等對(duì)多肽及膠原肽進(jìn)行分析。在此基礎(chǔ)上,以人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7為體外研究對(duì)象,通過MTT法檢測總肽、膠原蛋白、多肽和膠原肽對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7增殖的抑制情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,超聲功率越大,鹿角盤總肽濃度越高,再結(jié)合SDS-PAGE電泳結(jié)果,我們選取200w超聲處理后總肽粗提物進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn);鹿角盤多肽經(jīng)Tricine-SDS-PAGE三層膠電泳檢測其分子質(zhì)量集中分布在6500Da以下;復(fù)合酶解法制備的膠原肽經(jīng)電泳及質(zhì)譜檢測其分子質(zhì)量集中分布在6500Da以下;MTT法檢測鹿角盤蛋白多肽對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7增殖的影響,結(jié)果顯示:與鹿角盤總肽和鹿角盤膠原蛋白對(duì)照組比較,鹿角盤多肽的抑制效果最好,其次為鹿角盤膠原肽,而鹿角盤總肽略好于鹿角盤膠原蛋白。其中鹿角盤多肽在濃度較低(20μg/mL)時(shí),對(duì)人MCF-7細(xì)胞的抑制率高于膠原肽。
【圖文】：

圖 2-1 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2-1Protein standard curve表 2-4 樣品溶液吸光度值Table 2-4 Sample solution luminosity values Tricine-SDS-PAGE 電泳檢測，梅花鹿角盤總肽蛋白含量較為豐富，其中在 20.1kDa 以圖可知，超聲功率越大，14.3kDa 下兩條帶明顯變?nèi)�，結(jié)選取 200w 超聲處理后總肽粗體物進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。 1 2 3 4 5 功率 0 200 285 380 475 值 0.0694 0.0815 0.0885 0.225 0.265 度 0.8036 1.1658 1.3212 2.0214 2.0572

圖 2-3 鹿角盤多肽的 SDS-PAGE 電泳圖Fig.2-3 SDS-PAGE Electrophoresis of polypeptides鹿角盤膠原肽盤膠原蛋白的角盤膠原蛋白液顏色呈淡黃色，，嗅之微腥濃度的測定（BCA 法）定吸光值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2-4 所示：標(biāo)92 代入公式可計(jì)算所提膠原蛋白濃度為 11y = 0.0754x - 0.0076R2 = 0.99660.10.20.30.40.50.60.70.80.9
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2700747