【摘要】：目的通過體內(nèi)外實驗研究清達顆粒(Qingda granule,QDG)對血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)誘導血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和遷移的影響,并探討其作用的分子機制,以期為臨床上QDG治療高血壓、保護靶器官提供進一步的實驗依據(jù)。方法1.動物實驗:18只10周齡雄性C57BL/6小鼠隨機分為Control組:生理鹽水(埋泵)+生理鹽水(灌胃);AngⅡ組:AngⅡ(埋泵)+生理鹽水(灌胃);AngⅡ+QDG組:AngⅡ(埋泵)+QDG(灌胃)。采用鼠尾套管無創(chuàng)血壓儀監(jiān)測小鼠血壓,4周后進行取材,收集小鼠胸主動脈,免疫組化檢測胸主動脈增殖細胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)的表達。2.細胞實驗:(1)VSMCs的分離及鑒定:采用組織貼塊法體外培養(yǎng)SD大鼠胸主動脈VSMCs,用免疫熒光染色對細胞進行鑒定,傳代后的3-6代用于實驗。(2)QDG及AngⅡ的濃度選擇:用不同濃度的QDG及AngⅡ干預VSMCs,采用MTT法檢測細胞活力。(3)QDG對AngⅡ誘導VSMCs的生物學影響及分子機制:將VSMCs分為Control組、AngⅡ組、AngⅡ+QDG 0.125 mg/mL組、AngⅡ+QDG 0.25 mg/mL組、AngⅡ+QDG 0.5mg/mL組,共5組。通過倒置顯微鏡觀察和細胞計數(shù)評估VSMCs的生長情況;采用MTT法檢測細胞活力;采用劃痕實驗和Transwell實驗觀察細胞遷移;通過Western blot檢測PCNA及MAPK和PI3K/AKT通路中相關(guān)蛋白的表達。結(jié)果1.動物實驗:QDG干預4周后,對AngⅡ誘導高血壓模型小鼠的收縮壓、舒張壓及平均動脈壓均有顯著的改善作用。免疫組化結(jié)果顯示,QDG能抑制AngⅡ誘導高血壓模型小鼠胸主動脈PCNA表達的上調(diào)。2.細胞實驗:(1)培養(yǎng)3代的VSMCs經(jīng)倒置顯微鏡觀察及免疫熒光檢測顯示,純度95%以上,鑒定為VSMCs。(2)QDG在濃度為0~0.5 mg/mL范圍內(nèi),對大鼠胸主動脈VSMCs沒有細胞毒性,AngⅡ在濃度為0.01~1μM范圍內(nèi),對大鼠胸主動脈VSMCs均具有增殖作用。因此選用QDG(0.125、0.25、0.5 mg/mL)和AngⅡ(1μM)用于后續(xù)實驗。(3)倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),QDG干預后能顯著抑制AngⅡ誘導的VSMCs生長,這個結(jié)果通過細胞計數(shù)得到了進一步證實。MTT檢測顯示,QDG干預后能顯著降低AngⅡ誘導的VSMCs活力增加。Western blot分析顯示,QDG干預后,能顯著下調(diào)AngⅡ誘導VSMCs PCNA的表達。(4)劃痕實驗及Transwell實驗結(jié)果顯示,QDG干預后能顯著抑制AngⅡ誘導的VSMCs遷移。(5)Western blot檢測結(jié)果顯示,1μM的AngⅡ能上調(diào)VSMCs中p-p38、p-JNK、p-ERK1/2、p-AKT的表達,并于5 min左右達到高峰,而對總的p38、JNK、ERK1/2、AKT無影響。QDG預處理12 h能顯著下調(diào)AngⅡ誘導的p-p38、p-JNK、p-ERK1/2、p-AKT的表達,對總的p38、JNK、ERK1/2、AKT無影響。結(jié)論QDG能顯著抑制AngⅡ誘導高血壓模型小鼠血壓的升高和胸主動脈VSMCs的增殖;QDG抑制VSMCs的增殖和遷移可能是通過抑制MAPK和PI3K/AKT通路的活化來實現(xiàn)的。我們的結(jié)果為QDG的臨床高血壓治療提供了進一步的實驗依據(jù)。
【學位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 屈明;;糖尿病腎病與血管緊張素Ⅱ的相關(guān)性研究[J];中國醫(yī)藥指南;2012年25期

2 任利群;李滎娟;郭曉珍;盛祖龍;劉乃豐;;羅格列酮對血管緊張素Ⅱ誘導血管平滑肌細胞增殖的影響[J];中國動脈硬化雜志;2010年09期

3 景濤;何國祥;王海東;劉建平;苗莉;冉擘力;;血管緊張素Ⅱ2型受體基因可調(diào)控體外培養(yǎng)的血管平滑肌細胞基質(zhì)金屬蛋白酶2的表達[J];中國動脈硬化雜志;2007年04期

4 仝連偉,朱曉東,任兵;長時間左心輔助對犬體內(nèi)血管緊張素Ⅱ及心鈉素的影響[J];廣東醫(yī)學;2002年06期

5 王道平,許玲;運動與血管緊張素Ⅱ[J];福建體育科技;2001年04期

6 呂金陵;;宣武醫(yī)院高血壓實驗室從白細胞中提取出血管緊張素Ⅱ[J];首都醫(yī)學院學報;1987年04期

7 趙連友,張寧仔;心力衰竭患者血漿腎素活性和血管緊張素Ⅱ濃度變化及其與鈉的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學學報;1988年06期

8 吳振英,余承高,張曉友,楊q;血管緊張素Ⅱ在兔第四腦室的心血管效應[J];同濟醫(yī)科大學學報;1988年02期

9 張東吉,楊貴貞;免疫細胞中的血管緊張素Ⅱ樣免疫活性物質(zhì)及其與高血壓的關(guān)系[J];中國免疫學雜志;1988年06期

10 袁秀芳;慢性穩(wěn)定型肺心病患者經(jīng)肺循環(huán)血管緊張素Ⅱ的形成[J];國外醫(yī)學.呼吸系統(tǒng)分冊;1988年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張永濤;宋啟春;王坤正;黨曉謙;;血管緊張素Ⅱ?qū)Τ晒羌毎置趩魏思毎吇鞍?1的作用及機制研究[A];中華醫(yī)學會第十二次全國內(nèi)分泌學學術(shù)會議論文匯編[C];2013年

2 尚明花;范昱;姚建;徐琴君;;雷帕霉素抑制血管緊張素Ⅱ誘導的血管內(nèi)皮細胞增生[A];2007年浙滬兩地腎臟病學術(shù)年會資料匯編[C];2007年

3 張岫美;劉慧青;魏欣冰;;氯沙坦對血管緊張素Ⅱ致培養(yǎng)的牛腦微血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用[A];新世紀 新機遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（下冊）[C];2001年

4 黃旭;趙丹;張明亮;王佐妤;趙鵬;韓燕飛;陸紅麗;嚴志強;許文燮;姜宗來;;血管緊張素Ⅱ?qū)彝瞄T靜脈平滑肌自發(fā)節(jié)律的調(diào)控作用[A];2008年全國生物流變學與生物力學學術(shù)會議論文摘要集[C];2008年

5 楊麗霞;郭瑞威;石燕昆;齊峰;;瞬時電壓通道1和核因子-κB在血管緊張素Ⅱ誘導內(nèi)皮滲透性增加中的作用[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 郭自強;王碩仁;朱陵群;牛福玲;黃啟福;;活血藥對血管緊張素Ⅱ致心肌肥大細胞內(nèi)鈣濃度變化的影響[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年醫(yī)師論壇論文匯編[C];2008年

7 張詠梅;魏爾清;張建福;胡霞;徐明;石s，

本文編號：2700105