【摘要】：目的:對中藥注射劑中的大分子蛋白質(zhì)進行檢查是嚴格控制中藥注射劑質(zhì)量、減少中藥注射劑不良反應發(fā)生的重要手段�，F(xiàn)行的2015年版中國藥典采用磺基水楊酸比濁法檢查中藥注射劑中的大分子蛋白質(zhì),該方法簡單易行、快速直觀,但靈敏度低、專屬性差,在檢查含有增溶性輔料的中藥注射劑時易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。本實驗在課題組前期研究的基礎上,采用柱切換技術(shù)建立二維高效液相色譜法,通過全面優(yōu)化該方法的實驗條件,測試該方法的工作性能,考察該方法對增溶性輔料吐溫-80和丙二醇的耐受濃度,實現(xiàn)對中藥注射劑中大分子蛋白質(zhì)的快速準確檢查。方法:1.通過對色譜柱類型、流動相種類、流速、柱切換時間等實驗條件進行優(yōu)化,確定閥切換時間,建立二維高效液相色譜體系,并對該體系的性能進行測試。2.對二維高效液相色譜系統(tǒng)進行方法學考察。綜合考慮注射劑組方種類以及是否添加增溶性輔料,最終確定了市售的28種45個批次的中藥注射劑作為研究對象,利用該方法對所有中藥注射劑樣品進行檢測,將檢測結(jié)果同藥典方法進行比較,從而對市場上中藥注射劑產(chǎn)品的質(zhì)量進行評價。3.通過對人為添加不同濃度吐溫-80和丙二醇的樣品及標準品溶液進行檢查,考察確定該方法對增溶性輔料的耐受程度。結(jié)果:1.實驗建立了二維高效液相色譜體系,經(jīng)過實驗優(yōu)化確定了實驗條件。第一維預處理色譜條件:色譜柱:Asahipak ODP-50 4E Guard-Columns(4.6× 10mm);流動相:A甲醇,B0.1%磷酸溶液。梯度洗脫:0-2min70%B-70%B,2-12min 70%B-0%B,12-17 min 0%B-70%B,17-20 min 70%B-70%B;檢測波長 280 nm;流速1mL/min。第二維分析色譜條件:色譜柱:TSKgel 5000 PWxl(7.8×300 mm,5μm);流動相:0.1mol·L-1硫酸鈉和0.1mol·L-1磷酸緩沖鹽等體積混合液(含30%甲醇);檢測波長280nm;流速:0.8mL·min-1。六通閥切換時間確定為10s-30s。2.二維高效液相色譜法的專屬性、線性、重復性、精密度等結(jié)果均符合要求。本實驗共選擇市售28種共45個批次的中藥注射劑進行檢測,并人為設定了含量限度,檢測結(jié)果表明所有中藥注射劑均合格,此外二維高效液相色譜法可以耐受的吐溫-80濃度8%,而相同濃度的丙二醇對方法沒有影響,表明大部分的中藥注射劑可以利用此方法得以準確檢測。結(jié)論:本研究針對藥典磺基水楊酸比濁法檢測中藥注射劑中大分子蛋白質(zhì)易出現(xiàn)假陽性的問題,建立了二維高效液相色譜法,該方法在準確度和靈敏度方面有了較大提高。本研究為中藥注射劑中的大分子蛋白檢查提供了新方法,為中藥注射劑的質(zhì)量控制提供了實驗依據(jù)。
【圖文】：

邐在樣品測逡逑定過程中，ｌｍＬ中藥注射液被稀釋了邋２５倍，即相當于中藥注射液中大分子蛋逡逑白的限量值為２０陽迎！／１。ＴＳＫ凝膠高效液相色譜圖見圖１－２。最后選取幾十批逡逑市售中藥注射劑進行檢測，將兩步凝膠法同磺基水楊酸比濁法的檢測結(jié)果進行逡逑比較發(fā)現(xiàn)，兩方法的檢測結(jié)果基本一致也說明了本實驗建立方法的可靠性。逡逑ｅ．粉逡逑0，祁，逡逑0潘邐３逡逑0．邋＾逡逑光邋￡３．３０－逡逑Ｂ．逡逑0．．邋２０＇邐Ａ逡逑／邋＼逡逑枿．邐Ｉ邋＼逡逑？？丨。．邐Ｉ邐＼逡逑Ｑ．ｆ３Ｓ＊邐！邐＼逡逑ＤＤ，＊ｃ＃邋ｍｍ邋ｏｏｖｐｓ邋ｍｍ邋ｏｄ？邋ｕ邋{潰錚錚輳椋翦澹恚潁礤，

本文編號：2699151