【摘要】：癌癥是近年來威脅人類健康的一大“殺手”,而化療是治療癌癥最重要的手段之一。然而由于化療藥物的無特異性分布,其顯著的毒副作用和療效缺乏則成為臨床試驗失敗的最主要原因。以納米技術(shù)為基礎(chǔ)的靶向藥物傳遞系統(tǒng)因能突破生理屏障、克服傳統(tǒng)化學藥物的藥代學弊端,而在癌癥治療中發(fā)揮著重要角色。樹狀物因較小的尺寸效應(yīng)及豐富的表面官能團,可作為優(yōu)良的藥物傳遞載體而倍受研究者青睞。雷公藤紅素雖具有顯著的抗癌效果,但其明顯的毒副作用,使其臨床應(yīng)用受限。本課題圍繞雷公藤紅素在結(jié)腸癌治療中的安全性和有效性問題,從而提出以樹狀大分子為功能化載體的新型納米藥物傳遞系統(tǒng),旨在實現(xiàn)結(jié)腸癌的高效低毒治療。本研究中運用EDC催化法,制備聚乙二醇及EpCAM核酸適配體功能化修飾的樹狀物-雷公藤紅素結(jié)合物。通過紫外/熒光光譜、尿素凝膠電泳等手段對其進行鑒定;采用動態(tài)光散射儀、掃描電鏡等手段表征其形貌及大小。利用雷公藤紅素的特定紫外吸收,計算和評估其連接效率及在不同pH環(huán)境下的釋放速率。通過水合粒徑及電勢的改變,研究該納米結(jié)合物的生物穩(wěn)定性。體外則采用共聚焦成像考察G5-PEG-EpCAM對人結(jié)腸癌SW620細胞和人胚腎AD293細胞的選擇性結(jié)合情況;采用MTT和Western Blot方法研究其對SW620和AD293細胞的體外增殖抑制及細胞凋亡誘導(dǎo)情況;體內(nèi)則利用小鼠的急毒實驗及移植瘤模型,來評估其體內(nèi)抗腫瘤活性及毒性降低情況;最后利用斑馬魚模型來考察其在體內(nèi)的生物安全性。研究結(jié)果表明,我們成功制備了具有良好水溶性的樹狀物-雷公藤紅素結(jié)合物,水合粒徑為120mn左右,電勢為-3.49mV,在生理環(huán)境下可長時間穩(wěn)定存在,且在不同的pH環(huán)境下都呈雙相釋放,可保證該納米藥物在釋放雷公藤紅素時有足夠的時間在腫瘤部位富集。該納米藥物載體能夠選擇性靶向結(jié)腸癌細胞SW620,并實現(xiàn)時間累積的胞內(nèi)在化效應(yīng)。MTT結(jié)果顯示,作用7h、24h時,celastrol-G5-PEG-EpCAM 對 SW620 細胞的 IC50 值為 celastrol 的 0.70 倍和 0.64倍,而對AD293細胞結(jié)果為1.32倍和1.61倍。Western Blot實驗結(jié)果也說明納米藥物有良好的體外抗腫瘤活性,同時降低對正常細胞的毒性。同時體內(nèi)的急毒實驗和抑瘤實驗也進一步證實納米藥物的良好抗腫瘤效果,并減弱雷公藤紅素對肝、腎的毒性。斑馬魚模型的評價結(jié)果也證實該納米藥物相對于游離celastrol具有更高的生物安全性�？傊�,我們所設(shè)計合成的樹狀物-雷公藤紅素納米藥物,可實現(xiàn)體外和體內(nèi)對結(jié)腸癌的高效低毒治療,從而為雷公藤紅素的預(yù)臨床抗癌應(yīng)用研究提供參考價值。
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Ｔｏｍａｌｉａｕ？等成功合成了聚酷胺－胺（ｐｏｌｙ（ａｍｉｄｏａｍｉｎｅ），ＰＡＭＡＭ）樹狀大分子之逡逑后，經(jīng)過三十年的發(fā)展，人們合成了邋１００多種不同類型的樹狀大分子。其典型的逡逑結(jié)構(gòu)如圖３所述，主要由三部分組成：多臂引發(fā)核，多個重復(fù)單元組成的支架，，逡逑可修飾的表面官能團。其中，多臂引發(fā)核決定該樹狀大分子的三維結(jié)構(gòu)，多個重逡逑復(fù)單元組成的支架發(fā)散開來形成的內(nèi)腔決定其主客體的性能，樹狀大分子表面可逡逑修飾的官能團則為進一步的聚合反應(yīng)等其他官能團的功能化修飾提供良好的基逡逑礎(chǔ)。樹狀大分子完整的結(jié)構(gòu)，可控的分子形狀和表面官能團，使樹狀大分子成為逡逑生物醫(yī)學應(yīng)用上的熱門材料ｕ°］。逡逑Ｎｉｌ：、ｓ、邐Ｎ邐＜邋／邋ＶＨｊ逡逑、邐、、二Ｓｒｓ：；‘逡逑菸？／邐l挘�？＿辶x賢跡常壕塒０罰肥髦ψ吹湫徒峁瑰義希疲椋紓酰潁邋澹常海校錚歟幔恚椋洌澹幔恚椋睿邋澹洌澹睿洌潁椋簦椋沐澹簦穡椋悖幔戾澹螅簦潁酰悖簦酰潁邋義希保常彩髯創(chuàng)蠓腫擁睦砘災(zāi)叔義嫌捎謔髯創(chuàng)蠓腫郵遣捎彌鴆繳さ姆絞膠銑傻�，所以树讋�(chuàng)蠓腫詠莆シ皺義仙⑾擔腫恿棵魅貳Ｄ殼吧唐坊氖髯創(chuàng)蠓腫擁姆稚⑾凳校模山鑫保

本文編號：2694305