【摘要】：中醫(yī)藥在治療腫瘤方面有著其獨(dú)特的優(yōu)勢。大黃蟄蟲丸是治療腫瘤的經(jīng)典名方。但是由于中藥復(fù)方的復(fù)雜性,大黃蟄蟲丸方中的藥效物質(zhì)尚不明確,這直接影響了其作用機(jī)制的深入研究,毫無疑問,明確大黃蟄蟲丸的抗腫瘤藥效物質(zhì)是進(jìn)一步開展藥理機(jī)制研究的前提。本論文主要從未知成分鑒別確定、細(xì)胞活性篩選、主要成分體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究三個(gè)層次全面考察了大黃蟄蟲丸抗腫瘤藥效物質(zhì)基礎(chǔ),以期進(jìn)一步闡釋大黃蟄蟲丸干預(yù)腫瘤的藥效物質(zhì)的科學(xué)內(nèi)涵。采用HPLC方法進(jìn)行大黃蟄蟲丸指紋圖譜的研究,建立大黃蟄蟲丸指紋圖譜,對市售大黃蟄蟲丸進(jìn)行了初步的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。在客觀表征大黃蟄蟲丸整體化學(xué)信息的基礎(chǔ)上,通過相似度分析、主成分分析和聚類分析,以及變異數(shù)和共有峰的峰占比統(tǒng)計(jì),并利用化學(xué)對照品,對其特征性成分進(jìn)行定性分析。同時(shí)為了驗(yàn)證這些成分以及更全面獲得大黃蟄蟲丸方中主要成分,利用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)及Peakview分析軟件鑒別出大黃蟄蟲丸方中137種化學(xué)成分,篩選獲得含量較高的成分,并對這次些成分進(jìn)行了藥味歸屬,其中大黃中15種,地黃20種,黃芩11種,桃仁和苦杏仁13種,白芍16種,甘草4種,動(dòng)物藥58種。結(jié)合HPLC指紋圖譜結(jié)果,通過HPLC-UV液相色譜技術(shù),對其中20種特征性成分(次黃嘌呤(Hypoxanthine)、尿囊素(Allantoin)、沒食子酸(Gallic acid)、苦杏仁苷(Amygdalin)、龍膽酸(2,5-dihydroxybenzoic acid)、芍藥苷(Paeoniflorin)、毛蕊花糖苷(Verbascoside)、對甲氧基苯乙酸(4-Hydroxyphenylacetic acid)、甘草素(Liquiritigenin)、黃芩苷(Baicalin)、柚皮素(Naringenin)、丹皮酚(Paeonol)、黃芩素(Baicalein)、漢黃芩素(Wogonin)、蘆薈大黃素(Aloeemodin)、甘草酸(glycyrrhizic acid)、大黃酸(Rhein)、大黃素(Emodin)、大黃酚(Chrysophanol)、大黃素甲醚(Physcion))進(jìn)行了含量測定,結(jié)果顯示白芍中的沒食子酸含量最高(2445.10±755.97)μg/g,其次是黃芩苷(2252.9±547.0)μg/g、苦杏仁苷(2164.10±694.51)μg/g 及毛蕊花糖苷(1795.83±604.25)μg/g等成分。君藥大黃中各蒽醌類成分含量略有差異,以大黃酚水平最高,其次大黃素、大黃酸,蘆薈大黃素及大黃素甲醚含量較低;動(dòng)物藥中次黃嘌呤含量較高;含量較低的為黃芩素、龍膽酸等成分,低于150pg/g。由于藥物發(fā)揮有效作用的是入血成分,我們對大黃蟄蟲丸入血成分進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示,并不是所有藥材成分都能入血,在入血成分的半定量分析中,我們發(fā)現(xiàn)在原方中含量一般的成分在入血成分中含量占比變高,這可能與物質(zhì)的轉(zhuǎn)換或者代謝有關(guān)。在此基礎(chǔ)上,通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究大黃蟄蟲丸中主要成分干預(yù)耐藥肝癌細(xì)胞SMMC-7721/DOX活力的影響,以期能夠盡可能多的獲得大黃蟄蟲丸治療肝癌相關(guān)的物質(zhì)基礎(chǔ),實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)次黃嘌呤、大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、漢黃芩素等5種成分對耐藥肝癌細(xì)胞活力抑制作用強(qiáng),可能是大黃蟄蟲丸發(fā)揮直接的抑制SMMC-7721/DOX活力的主要藥效物質(zhì)。最后,我們盡可能多的選取這些入血有效成分,研究大黃蟄蟲丸的大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)行為。結(jié)果顯示有效成分的體內(nèi)生物利用度均有不同程度的增加。綜上,本文通過三個(gè)不同層次客觀表征了大黃蟄蟲丸抗腫瘤有效成分化學(xué)信息,結(jié)合細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和藥物動(dòng)力學(xué)研究,獲得大黃蟄蟲丸干預(yù)耐藥肝癌細(xì)胞的藥效物質(zhì)及其體內(nèi)吸收代謝規(guī)律,以期為探討大黃蟄蟲丸抗腫瘤物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。
【圖文】：

黃等素（Ｂａｉｃａｌｅｉｎ）、漢黃岑素（Ｗｏｇｏｎｉｎ）、蘆薈大黃素（Ａｌｏｅｅｍｏｄｉｎ）、甘草酸（ｇｉｙｃｙｒｒｈｉｚｉｃ逡逑ａｃｉｄ）、大黃酸（Ｒｈｅｉｎ）、大黃素（Ｅｍｏｄｉｎ）、大黃酚■邋（Ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ）、大黃素甲醚（Ｐｈｙｓｃｉｏｎ）逡逑等，其結(jié)構(gòu)式見圖１－２。逡逑５逡逑

圖１－３技術(shù)路線圖逡逑參考文獻(xiàn)逡逑［１］國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典（一部）［Ｓ］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，，２０１５．逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284;R285.5

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本文編號：2692194