【摘要】：目的通過比較滅活大腸桿菌(E.Coli)菌株免疫+乙酸(AA)灌腸、單純滅活大腸桿菌(E.Coli))免疫、單純乙酸(AA)灌腸三種不同方法建立的潰瘍性結腸炎模型,探討一種理想的潰瘍性結腸炎造模方法;從結腸組織、相關血液指標、血清免疫學指標、結腸組織免疫檢測、肝腎功能等方面,對葛仙湯治療大鼠潰瘍性結腸炎的相關機制進行研究,為中醫(yī)藥驗方“葛仙湯”治療潰瘍性結腸炎有效性方面提供一定的客觀依據。方法1.健康SD雄性大鼠120只,隨機均分為4組,第1、2組分別在實驗第1、7、14、20D用滅活大腸桿菌菌株懸濁液注射于大鼠足底、腹部、背部皮下及腹腔內,第4組為對照組,以等量生理鹽水替代。實驗第21d,第1、3組用5%乙酸灌腸。每日觀察各組大鼠精神狀態(tài)、毛色、飲食、大便性狀,每周予以稱重、檢測大鼠大便隱血;分別于乙酸灌腸后第1w、2w、3w每組隨機處死10只,斷頭取血,檢測血清中IL-6的變化,處死大鼠,測量結腸長度并稱重,肉眼及光鏡觀察結腸粘膜組織改變,免疫組化檢測結腸中TNF-α陽性表達。2.取(E.Coli)菌株免疫+(AA)灌腸法成功造模的SD大鼠40只,按照隨機化原則分為葛仙湯高劑量組、中劑量組、低劑量組,對照組。葛仙湯高、中、低劑量組分別予以生藥24g/kg、12g/kg、6g/kg灌胃給藥。觀察各組大鼠精神狀態(tài)、毛色、飲食、大便性狀、體重,檢測大鼠大便隱血;灌胃后21D處死上述40只大鼠,檢測血清中IL-6、IL-10、白細胞、血小板、SCr、BUN、AST、ALT,測量結腸長度并稱重,觀察腸壁組織學變化,免疫組化檢測結腸TNF-α、i NOS表達。結果1.第1組乙酸灌腸后2D開始出現(xiàn)精神萎靡,反應遲鈍,活動減少,扎堆,毛色無華、變脆;大便次數(shù)增多,大便變稀,出現(xiàn)粘液血便或膿血便,體重減輕;1-3w結腸潰瘍、炎癥、增厚,長度縮短,結腸重量增加;結腸粘膜充血、水腫、高度糜爛,有單個或多處潰瘍;結腸重度炎癥,病變深及粘膜下層、肌層、漿膜層,基底2/3隱窩被破壞,或僅有完整表面上皮;血清IL-6、腸粘膜TNF-α陽性表達積分值明顯升高;各指標均與對照組有顯著性差異。2.第2組造模完成后1-3w,大鼠精神狀態(tài)可,活動如常,無明顯扎堆,毛色稍無光澤,大便質稍軟,未見稀變及粘液便,大便隱血實驗(+),無明顯體重減輕;結腸重量、長度與對照組無差異;結腸粘膜輕度充血、水腫,輕度糜爛,無潰瘍形成;結腸粘膜呈慢性炎癥改變,病變局限于粘膜下層,基底1/3隱窩被破壞;血清IL-6稍升高;腸粘膜TNF-α陽性表達積分值增高;以上各觀測指標均與對照組無差異。3.第3組造模完成后1w時出現(xiàn)精神萎靡,反應遲鈍,活動減少,扎堆,毛色無華、變脆;大便次數(shù)增多,大便變稀,出現(xiàn)粘液血便或膿血便,體重減輕;結腸潰瘍、炎癥、增厚,長度縮短,結腸重量增加;結腸粘膜粘膜充血、水腫、高度糜爛,有單個或多處潰瘍;結腸重度炎癥,病變深及粘膜下層、肌層、漿膜層,基底2/3隱窩被破壞,或僅有完整表面上皮;血清IL-6、腸粘膜TNF-α陽性表達增高;以上各指標均與對照組有差異。2-3w時體重逐漸增加,大便逐漸變硬,粘液膿血便逐漸消失,隱血(+);結腸長度增長,重量減輕;結腸粘膜充血水腫減輕,潰瘍逐漸愈合;病變局限于粘膜下層,基底1/3隱窩被破壞;血清IL-6、腸粘膜TNF-α陽性表達積分值逐漸下降;各組指標3w時與對照組無明顯差異。4.葛仙湯各治療組的大鼠結腸炎癥、充血、水腫減輕,病變范圍縮小,隱窩破壞減少,結腸粘膜糜爛和潰瘍愈合,大便逐漸成形,膿血便減少,體重增加,疾病活動指數(shù)高、中、低與對照組有顯著性差異,P0.01,高、中、低劑量組之間無差異,P0.05。5.葛仙湯各治療組血中白細胞、血小板數(shù)量減少,高、中、低治療組與對照組之間均有顯著性差異,P0.01,各治療組對于降低白細胞方面無差異,高劑量組降低血小板與中低劑量組之間均有差異,P0.05。高、低劑量對紅細胞數(shù)量無明顯升高作用,與對照組無差異。中劑量組紅細胞數(shù)量增高與對照組有差異,但與正常組差異顯著。6.葛仙湯各治療組大鼠血清IL-6含量減少,IL-10的含量增加,高、中、低劑量治療組與對照組之間均有顯著性差異,P0.01,高劑量升高IL-10的含量的作用與中、低劑量組有差異,P0.05;中劑量降低IL-6含量的作用與高、低劑量有差異,P0.05。7.葛仙湯各治療組大鼠結腸組織中i NOS、TNF-α陽性表達積分值降低,高、中、低劑量組與對照組之間均有顯著性差異,P0.01,高、中劑量組與低劑量組之間有差異,P0.05,高、中劑量組之間無差異。8.葛仙湯高、中、低治療組血清中SCr、BUN、AST、ALT與正常組、對照組之間均差異無統(tǒng)計學意義,P0.05。結論1.滅活大腸桿菌(E.Coli)菌株免疫+乙酸(AA)灌腸免疫復合法建立的潰瘍性結腸炎模型,病變更類似人UC,持續(xù)時間長,是較理想的造模方法。2.葛仙湯對大鼠潰瘍性結腸炎具有減少炎癥細胞、血小板數(shù)量。抑制炎癥因子釋放,抗凝血,促進抗炎因子生成等作用。3.葛仙湯能夠促進潰瘍性結腸炎粘膜的修復。4.葛仙湯對肝腎功能無明顯損傷�？傊�,實驗結果說明,葛仙湯通過對炎性細胞、炎癥因子、血小板、結腸病理組織改變的影響,對潰瘍性結腸炎有一定的治療作用。
【圖文】：

）大鼠結腸組織學損傷評分 結腸組織大體表現(xiàn)見圖 1，HE 染色，光鏡下 2-5。1w 時第 1、3 組粘膜炎癥程度較重，病變深及粘膜下層或肌層，偶爾層，基底隱窩部分破壞或全部破壞，上皮部分或全部破壞 ，第 2 組結腸粘血、水沖，輕度糜爛，無潰瘍形成；結腸粘膜輕度炎癥，病變局限于粘膜層 1 /3 隱窩被破壞，第 1、3 組與第 2、4 各組之間均有顯著性差異( P<0.01),第 4 組之間無差異，P>0.05；2w 時第 1 組粘膜炎癥程度基本同前，第 3 組開始愈合，，伴瘢痕形成，第 2 組粘膜充血水腫較前加重，無潰瘍形成，第 1、4 組之間有顯著性差異，P<0.01，第 2 組與第 4 組之間有差異，P<0.05； 組粘膜呈中度或重度炎癥，病變深及粘膜下層或肌層，仍有單個或多處陳舊基底隱窩部分破壞，上皮部分破壞，第 2 組粘膜充血水腫明顯，無糜爛或輕無潰瘍形成，第 3 組潰瘍基本愈合，病變局限于粘膜下層，基底 1 /3 隱窩 組與第 2、4 組之間均有顯著性差異（ P<0.01），第 2、3 組與第 4 組之間無>O.05），結果見表 6。

1w 時 2w 時 3w 時圖 2 第 1 組不同時期結腸 HE 染色圖片（1×10 倍光鏡下）1w 時 2w 時 3w 時圖 3 第 2 組 1、2、3w 時結腸 HE 染色圖片（1×10 倍光鏡下）
【學位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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