發(fā)布時間：2020-05-25 19:38

【摘要】：背景:膝骨性關節(jié)炎(Knee Osteoarthritis,KOA)是以軟骨分解、破壞,骨組織重建、增生為病理改變,以疼痛、關節(jié)活動受限為主要臨床表現(xiàn)的多發(fā)骨科疾病。該病在中老年人群中普遍存在,使患者飽受因反復疼痛及對致殘的恐慌而帶來的巨大精神壓力。有研究證實膝關節(jié)滑膜炎是膝骨關節(jié)炎發(fā)病及發(fā)展的關鍵推動因素。軟骨降解的碎片引起滑膜的炎癥反應,炎癥滑膜又進一步釋放炎性遞質、細胞因子及蛋白酶等,反作用于軟骨,加劇軟骨破壞。若能早期、有效的減輕滑膜的炎性反應,減少對軟骨的破壞,則可以顯著減緩膝骨關節(jié)炎的發(fā)展。中藥外治法可以將中草藥中的有效成分通過透皮吸收而作用于患處,具有方便、安全、經濟適用等優(yōu)點。消瘀接骨散是國家級名老中醫(yī)丁鍔教授創(chuàng)立的外用方藥,在安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院骨傷科中廣泛應用于膝骨關節(jié)炎的治療,可以有效緩解膝骨關節(jié)炎早期出現(xiàn)的關節(jié)疼痛、腫脹,臨床療效顯著,但目前尚不清楚其作用機制。目的:通過建立大鼠早期膝骨關節(jié)炎模型,觀察外敷消瘀接骨散對膝骨關節(jié)炎滑膜組織中基質金屬蛋白酶1(Matrix Metalloproteinase-1,MMP-1)、基質金屬蛋白酶3(Matrix Metalloproteinase-3,MMP-3)的表達影響,以及觀察膝關節(jié)滑膜組織在治療前后的病理改變,探究消瘀接骨散治療膝骨關節(jié)炎的具體作用途徑和方式。方法:選取3月齡健康雄性SD大鼠75只,體重250~300g,依照隨機數(shù)字表法各隨機抽取14只,分為正常組和假手術組,分籠飼養(yǎng);其余47只進行手術造模,建立膝骨關節(jié)炎模型。假手術組僅為驗證手術創(chuàng)傷因素是否影響實驗結果,術后一周開始,每日定時驅趕所有組大鼠奔跑,強迫活動右下肢,每次30min,持續(xù)4周。4周后,在手術造模大鼠中隨機抽取5只處死,檢驗造模是否成功。造模成功后,將手術造模組42只大鼠隨機分為3組,即模型組、消瘀接骨散組(中藥組)、扶他林組(西藥組),每組14只,每組實驗動物按照實驗設計藥物劑量給藥。給藥4周后,處死所有動物,提取標本制作蘇木精-伊紅染色病理切片,進行光鏡下觀察。同時分別采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Realtime fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction,RTFQ PCR),蛋白質印記法(Western Blotting,WB)和酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)檢測滑膜組織中MMP-1和MMP-3的相對表達量,并進行統(tǒng)計學分析。結果:在一個療程治療結束后,模型組大鼠滑膜組織中MMP-1和MMP-3的m RNA含量高于其余各組(P0.05),MMP-1消瘀散組和扶他林組之間比較均無明顯差異(P0.05),MMP-3消瘀散組表達量略低于扶他林組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);蛋白質印跡法分析則表明MMP-1和MMP-3在模型組大鼠滑膜組織中大量表達,與消瘀散組和扶他林組分別比較,差異都存在統(tǒng)計學意義(P0.05),消瘀散與扶他林組之間比較,無顯著差別(P0.05);酶聯(lián)免疫吸附法分析指出MMP-1和MMP-3兩種蛋白在模型組中被大量分泌至大鼠滑膜組織中,與消瘀散組和扶他林組分別比較,差異存在統(tǒng)計學意義(P0.05),MMP-1消瘀散組和扶他林組比較,無顯著性差異(P0.05),MMP-3消瘀散組表達量略低于扶他林組,差異存在統(tǒng)計學意義(P0.05);滑膜組織病理切片觀察發(fā)現(xiàn),模型組滑膜有明顯增生并伴隨炎性細胞大量浸潤,周圍血管顯著增生,與模型組比較消瘀散組滑膜增生相對較少,少量炎性細胞浸潤并伴有少量血管增生,扶他林組相比模型組滑膜增生較少,血管增生和炎性細胞浸潤均與消瘀散組大致相當。結論:此次實驗研究發(fā)現(xiàn)消瘀接骨散可以有效減輕大鼠早期膝骨關節(jié)炎模型滑膜炎癥的病理改變,并能顯著減少滑膜組織中參與軟骨基質破壞與降解的兩種關鍵蛋白酶MMP-1和MMP-3的m RNA表達量,蛋白合成及分泌量。中藥與西藥抑制MMP-1在KOA滑膜組織表達的作用相同,在抑制MMP-3在KOA滑膜組織表達的作用方面中藥組優(yōu)于西藥組。其作用機制可能是消瘀接骨散能有效緩解滑膜炎癥,抑制MMP-1和MMP-3的表達,減少關節(jié)軟骨的降解與破壞,從而減輕膝骨關節(jié)炎的癥狀及疾病進展。
【圖文】：

3 結果.1 造模結果及過程中大鼠行為表現(xiàn)造模前觀察所有大鼠，均無后膝關節(jié)的異常表現(xiàn)，飲食及活動狀態(tài)良好。按照實驗設行造模，在手術方式造模的 47 只大鼠中，有 2 只因麻藥過量而死亡，剩余 45 只均在成功后 1 小時左右蘇醒，造模后 2~3 天逐漸恢復正�；顒樱g后 7 天切口愈合良好，遂予以縫線；術后 1 周開始每日驅趕所有組動物奔跑 30min，持續(xù) 4 周，4 周后所有大鼠精神狀良好，，造模后的大鼠出現(xiàn)右后膝關節(jié)活動度差，大鼠跛行等，在行手術的大鼠中隨機抽取，處死后切開關節(jié)囊發(fā)現(xiàn)關節(jié)囊略有增生，關節(jié)滑液變多且呈淡黃色，軟骨表面略顯粗部分潰瘍和缺損，軟骨邊緣骨贅形成不明顯，取患側關節(jié)滑膜制作 HE 病理切片觀察見滑織增生明顯，細胞間隙及滑膜外層出現(xiàn)中量炎細胞浸潤并見大量血管增生（圖 1-4），符起 KOA 樣改變，證實造模成功。

3 結果.1 造模結果及過程中大鼠行為表現(xiàn)造模前觀察所有大鼠，均無后膝關節(jié)的異常表現(xiàn)，飲食及活動狀態(tài)良好。按照實驗設行造模，在手術方式造模的 47 只大鼠中，有 2 只因麻藥過量而死亡，剩余 45 只均在成功后 1 小時左右蘇醒，造模后 2~3 天逐漸恢復正常活動，術后 7 天切口愈合良好，遂予以縫線；術后 1 周開始每日驅趕所有組動物奔跑 30min，持續(xù) 4 周，4 周后所有大鼠精神狀良好，造模后的大鼠出現(xiàn)右后膝關節(jié)活動度差，大鼠跛行等，在行手術的大鼠中隨機抽取，處死后切開關節(jié)囊發(fā)現(xiàn)關節(jié)囊略有增生，關節(jié)滑液變多且呈淡黃色，軟骨表面略顯粗部分潰瘍和缺損，軟骨邊緣骨贅形成不明顯，取患側關節(jié)滑膜制作 HE 病理切片觀察見滑織增生明顯，細胞間隙及滑膜外層出現(xiàn)中量炎細胞浸潤并見大量血管增生（圖 1-4），符起 KOA 樣改變，證實造模成功。
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：2680641