發(fā)布時間：2020-05-20 08:22

【摘要】：藤黃(Gamboge)系藤黃科植物藤黃樹所分泌的樹脂。新藤黃酸(Gambogenic acid,GNA)是從藤黃中分離得到的重要成分。GNA抗癌譜廣、抗癌活性強、在體內外具有較強的抗腫瘤活性。然而,其血管刺激性大、半衰期短、水溶性差缺點限制了其臨床應用。目的:本課題采用PEG化脂質體包裹GNA,以期減小GNA的血管刺激性、延長半衰期、增強體內外抗腫瘤活性。方法:(1)本課題采用注入法制備新藤黃酸PEG化脂質體(GNA-PEG-LPs),利用單因素考察和正交試驗優(yōu)化處方與工藝;從外觀形態(tài)、包封率、載藥量、粒徑分布、DSC、Zeta電位、穩(wěn)定性試驗、體外釋放試驗等方面進行GNA-PEG-LPs表征和質量評價;(2)選用人肺癌A549細胞、人胃癌SGC-7901細胞、人肝癌HepG2細胞,通過MTT實驗、DAPI染色、Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞儀檢測、Western blot等試驗考察GNA-PEG-LPs的細胞藥效學;(3)采用家兔耳緣靜脈血管刺激性試驗、溶血性試驗來評價GNA-PEG-LPs的安全性;(4)采用LLC荷瘤小鼠模型,評價GNA-PEG-LPs的體內抗腫瘤藥效學,對腫瘤組織進行免疫組化檢測相關凋亡蛋白的變化,并對給藥后小鼠主要器官進行HE染色初步評估GNA-PEG-LPs的安全性;(5)采用SD大鼠單次給藥,比較GNA和GNA-PEG-LPs在大鼠體內的藥動學參數差異。結果:(1)GNA-PEG-LPs最優(yōu)工藝處方的包封率為(88.13±1.31)%,載藥量為(3.72±0.04)%;在透射電鏡下觀察發(fā)現所得的脂質體為規(guī)則的球形,GNA-PEG-LPs的平均粒徑為(90.13±0.16)nm,PDI值為(0.092±0.003),Zeta電位為(-22.10±0.20)mV;DSC分析結果表明有新物相生成;物理穩(wěn)定性考察結果表明GNA-PEG-LPs在4℃下放置4周,GNA-PEG-LPs的包封率、粒徑等基本穩(wěn)定;另外體外釋放的結果表明GNA-PEG-LPs具有緩釋的性質。(2)體外細胞藥效試驗結果表明空白載體基本不對細胞產生毒性。與GNA溶液相比,GNA-PEG-LPs對A549、SGC-7901和HepG2細胞抑制作用和促進其凋亡的藥效更加明顯,并且上調Bax,caspase-3,下調Bcl-2蛋白的趨勢更加明顯,表明GNA-PEG-LPs很可能通過線粒體途徑誘導細胞凋亡。(3)耳緣靜脈血管刺激性試驗結果顯示GNA-PEG-LPs血管刺激性較小,溶血實驗發(fā)現,當GNA-PEG-LPs的脂質濃度小于2.28 mg/mL時,明顯的溶血現象不會產生。(4)體內抗腫瘤藥效試驗發(fā)現,與GNA原料藥相比,GNA-PEG-LPs可以顯著抑制LLC荷瘤小鼠的腫瘤生長。免疫組化研究發(fā)現GNA-PEG-LPs上調了LLC荷瘤小鼠腫瘤組織Bax,caspase-3蛋白的表達,下調了Bcl-2蛋白的表達。HE染色表明GNA的給藥劑量(2mg/kg,隔日給藥)對小鼠的主要器官(心、肝、脾、肺、腎)無明顯影響,同時也說明了GNA-PEG-LPs的安全性。(5)采用HPLC-UV系統(tǒng),建立了GNA生物樣品的分析方法。比較了單次給藥后GNA和GNA-PEG-LPs的藥動學差異。結果表明PEG化脂質體包裹GNA后,半衰期延長了2.84倍,AUC增加了2.97倍。結論:本研究成功制備了新藤黃酸PEG化脂質體,可以延長半衰期,減小血管刺激性,在體內外顯示較強的抗腫瘤藥效,是具有潛力的安全有效的納米載體。
【圖文】：

圖 1 圖文摘要：新藤黃酸 PEG 脂質體的制備、體內外抗腫瘤藥效學、初步藥動學研究Fig.1 Graphical abstract: Preparation, in vitro/in vivo antitumor activity and preliminarypharmacokinetics of Gambogenic acid-loaded PEGylated liposomes

1 GNA HPLC 色譜圖：A: 空白 PEG 化脂質體; B: GNA; C:GNA-PEGPLC chromatograms of GNA: A: Blank PEG-LPs; B: GNA; C: GNA-P曲線的建立取儲備液適量，用甲醇稀釋適當倍數即得濃度為 0.02、0.05.00 和 10.00 μg/mL 的系列對照品溶液，分別過 0.45 μm 濾膜件進樣，，測定峰面積。重復測定多次（n=5）。以峰面積(y圖進行線性回歸，回歸方程：y=39656x-243.86，(R2=0.999在 0.02~10.00 μg/mL，峰面積和濃度的線性關系良好。度試驗取對照品儲備液適量，用甲醇定容，配制低、中、高（0.05
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R283.6;R285

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本文編號：2672336