【摘要】：慢性濕疹(chronic eczema)具有反復性,難治性的發(fā)病特點,其發(fā)病機制復雜。西藥副作用大,療效局限,中醫(yī)辨證論治有優(yōu)勢;研究濕疹的發(fā)病機理,探索中醫(yī)藥治療濕疹,具有重要的理論意義和應用價值。1.二硝基氯苯誘導C57小鼠慢性濕疹模型復制①目的:確定二硝基氯苯(2,4-Dinitrochlorobenzene,DNCB)誘導C57小鼠慢性濕疹模型的最佳造模濃度。②方法:于d1、d2,將7%DNCB丙酮溶液50ul涂于小鼠腹部皮膚致敏。于d6,以0.26%～0.96%(k=0.316)9個梯度濃度的DNCB丙酮溶液lOOul,均勻涂抹于小鼠背部皮膚激發(fā),每隔3d一次,共4次。對照組涂抹100ul丙酮溶液。觀察皮膚大體變化,形態(tài)計量表皮體積比,回歸DNCB造模的半數有效濃度(ED50)。⑧結果:DNCB對小鼠表皮體積比的作用呈劑量依賴性,其ED50為37.25,擬合的量效方程為 Y=0.04+0.82/[1+10(28.15-17.92x)],置信區(qū)間為 33.04～41.99,R=0.95。④結論:成功復制了 DNCB誘導的小鼠慢性濕疹模型DNCB;最佳造模濃度為0.37%。2.鮮膚膏及其拆方防治慢性濕疹的量效關系①目的:探究鮮膚膏防治慢性濕疹小鼠模型的量效關系。②方法:于d1、d2,將7%DNCB丙酮溶液50ul涂于小鼠腹部皮膚致敏。于d6,以0.37%的DNCB丙酮溶液100ul,均勻涂抹于小鼠背部皮膚激發(fā),每隔3d一次,共4次。于激發(fā)日起,鮮膚膏組、地烏膏組、鮮膚膏去地烏組分別給予梯度劑量鮮膚膏(生藥量11.71～11662.50 mg.kg-1·d-1,k=0.316),地烏膏(生藥量 0.53～530.12 mg.kg-1·d-1,k=0.316),鮮膚膏去地烏膏(11.18～11132.40 mg·kg-1·d-1,k=0.316)均勻涂抹于小鼠背部皮膚予以治療。模型組涂抹基質(60mg/只)。HE染色觀察病理特點,ELISA檢測血清IL-4、IL-13含量;Prism5.0非線型可變斜率回歸計算半數有效劑量(ED50),比較鮮膚膏組、地烏組、鮮膚膏去地烏組的藥效,觀察地烏的配伍增效作用。③結果:鮮膚膏組、地烏組、鮮膚膏去地烏組藥效具有劑量依賴特征,量效曲線呈“S”型。鮮膚膏組療效最優(yōu),顯著降低表皮體積比(ED50為377.90 mg.kg-1·d-1),降低血清IL-4(ED50為 198.70 mg·kg-1·d-1)、IL-13(ED50為117.60 mg·kg-1·d-1)含量。與鮮膚膏組比較,地烏組與鮮膚膏去地烏組的量效曲線分別右移。④結論:鮮膚膏及其拆方均能有效治療慢性濕疹;鮮膚膏的療效最優(yōu);地烏有配伍增效作用。其最佳治療劑量為377.90 mg.kg-1·d-1。3.鮮膚膏防治慢性濕疹的免疫藥效及機制初探①目的:探討鮮膚膏防治慢性濕疹的藥效觀察及機制初探。②方法:于d1、d2,將7%DNCB丙酮溶液50μl涂于小鼠腹部皮膚致敏。于d6,以0.2%DNCB丙酮溶液100μl,均勻涂抹于小鼠背部皮膚發(fā)敏,每隔3d一次,共8次。分別給予他克莫司,除濕止癢軟膏,鮮膚膏高劑量(5180.OOmg·kg-1·d-1)、中劑量(1640.00 mg·kg-1·d-1)、低劑量(519.OOmg.kg-1·d-1),地烏皂苷(2.50 mg·kg-1·d-1),蛇床子素(5.20 mg·kg-1·d-1),吳茱萸堿(4.00mg·kg-1·d-1)均勻涂抹大鼠背部皮損予以治療。模型組涂抹基質。觀察其皮損大體變化,HE染色觀察病理特征,形態(tài)計量表皮體積比,ELISA檢測血清IL-4、IL-13含量,免疫組化檢測IL-4R,p-JAK1,p-Stat6,角蛋白K6原位蛋白表達量。③結果:藥效觀察:(1)大體觀察:與對照組相比,模型組大鼠皮損紅斑,水腫;與模型組相比,給藥組均可不同程度上改善大鼠濕疹皮損的紅斑,水腫等臨床表現。(2)病理觀察:與對照組相比,模型組病理表現為濕疹皮損處表皮增厚,棘細胞層肥厚,角質層可見明顯的角化不全及過度角化;與模型組相比,各給藥組明顯改善了大鼠濕疹皮損的病理改變。(3)表皮體積比:與對照組相比,模型組大鼠皮損的表皮體積比顯著增加;與模型組相比,給藥組均能有效降低表皮體積比,其中他克莫司療效最優(yōu);與陽性藥組相比,鮮膚膏高劑量組較他克莫司組無差異。(4)血清IL-4.:與對照組相比,模型組血清IL-4顯著升高;與模型組相比,給藥組均能有效降低血清IL-4,且療效無差異。(5)血清IL-13:與對照組相比,模型組血清IL-13顯著升高;與模型組相比,各給藥組降低血清IL-13,其中他克莫司組療效最優(yōu);與陽性藥組比較,鮮膚膏中、低劑量組,地烏皂苷組、蛇床子素組較他克莫司組無差異。(6)K6:與對照組相比,模型組角蛋白K6顯著升高;與模型組相比,給藥組的角蛋白K6的原位蛋白表達量顯著降低,其療效無差異。機制初探:(1)IL-4R:與對照組相比,模型組角質形成細胞的IL-4R的原位蛋白量升高;與模型組相比,給藥組能不同程度降低IL-4R的陽性表達;與陽性藥組相比,蛇床子素組較他克莫司組無差異。(2)p-JAK1:與對照組相比,模型組角質形成細胞的p-JAK1的原位蛋白表達量明顯升高;與模型組相比,給藥組的p-JAK1的陽性蛋白表達量顯著降低;與陽性藥相比,鮮膚膏高、中、低劑量組,地烏皂苷組較他克莫司組、除濕止癢軟膏組無差異。(3)p-STAT6:與對照組相比,模型組角質形成細胞p-STAT6的原位蛋白表達量顯著升高;與模型組相比,各給藥組p-STAT6的陽性表達量降低,各組無明顯差異。④結論:鮮膚膏可干預IL-4R-JAK1-STAT6信號通路轉導,抑制角質形成細胞的異常增殖與活化,防治慢性濕疹。
【圖文】：

弦滑或細逡逑厚粗糙，干燥舌紅少苔邐滋陰疏逡逑數邐一貫裂，瘙癢頗甚或苔光剝邐肝逡逑復不愈，肥厚逡逑舌質淡，苔脈沉細或疏風清逡逑瘙癢，有抓痕邐消風薄白邋沉緩邋肺逡逑燥、脫屑、肥厚、逡逑寬、色素沉著、邐滋養(yǎng)腎六味舌紅苔少脈細數樣變、或皮色紫邐陰邐湯逡逑厚，粗糙，色鮮舌質淡，苔邐溫補腎逡逑脈弱邐真武，呈苔蘚樣變水滑邐陽逡逑

逑均勻涂抹于小鼠背部剃毛區(qū)皮膚激發(fā)，每隔３ｄ—次，共４次。對照組給予丙酮溶液ｌＯＯｕｌ。逡逑ｄ２０，邋１０％水合氯醛麻醉后，腹主動脈取血，灌注固定，取背部皮膚備檢（；圖１）。逡逑在腹部選取邐背部剃毛２＊２叫涂抹９個梯度濃度ＫＯ逡逑２＊＾面積邐？0邐｜邐１邋處死逡逑？３邐０邐１邐２邐６邐１０邐１４邐１８邐２０逡逑圖１實驗時間進度逡逑１．３指標觀察逡逑（１）
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2669457