【摘要】：核桃屬胡桃科胡桃屬植物,在我國種植歷史悠久,分布廣泛,是山東、河北、山西的重要經(jīng)濟(jì)作物,產(chǎn)量巨大。核桃中油脂含量高達(dá)60%-70%,核桃油富含不飽和脂肪酸及植物甾醇、維生素E等多種藥理功效成分,具有提高記憶能力、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理活性。由于不飽和脂肪酸為核桃油中的主要功效成分,為研究不同制備方式對其含量及功效的影響,本文分別以冷榨法、水酶法、索氏提取法制備的核桃油為研究對象,進(jìn)行了以下研究:首先以蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)為檢測器,研究建立了核桃油中脂肪酸的HPLC-ELSD分析方法,對色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化,確定為:采用 Eclipse XDB-C18(4.6×150,5μm)色譜柱,甲醇/水(含 0.1%醋酸)(83:17,v/v)為流動相,柱溫:30℃,流速:1 mL·min-1,蒸發(fā)光散射檢測器溫度70℃,N2載氣流量為2.0mL·min-1,并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證,結(jié)果顯示,該方法的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及回收率都較好。采用HPLC-MS方法鑒定了各脂肪酸的分子結(jié)構(gòu),確定了核桃油中脂肪酸成分種類。在上述方法的基礎(chǔ)上,定量測定核桃油中脂肪酸含量,對核桃油樣品的皂化條件進(jìn)行了單因素考察,以總脂肪酸含量為考察指標(biāo),確定最佳皂化條件為:KOH-乙醇溶液濃度1.0mol·L-1,皂化時間40min,皂化溫度70°℃。在最佳皂化條件下比較了三種不同方法制備的核桃油中各脂肪酸及總脂肪酸含量,結(jié)果顯示,水酶法制備核桃油中總脂肪酸含量及不飽和脂肪酸含量均高于其他兩種方法制備的核桃油。探索了核磁共振波譜法對核桃油中各脂肪酸含量的測定,并與HPLC法測定的含量進(jìn)行了比較,無顯著性差異,證實(shí)了該方法的可靠性。采用紫外檢測器建立了核桃油中甘油三酯及脂類成分的HPLC-UV分析方法,確定色譜條件為:采用AgilentEclipse XDB-C18(4.6×250,5μm)色譜柱,乙腈:異丙醇:正已烷(66:20:14,v/v/v)為流動相,柱溫:20℃,流速:0.8mL·min-1,檢測波長210nm,在該條件下,各成分分離良好。對核桃油進(jìn)行了紅外光譜(IR)表征,根據(jù)IR譜圖中各基團(tuán)的特征吸收峰,初步確立了核桃油質(zhì)量控制的紅外圖譜。最后采用Morris水迷宮及穿梭箱試驗(yàn)法,比較了水酶法及冷榨法制備核桃油對改善小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用,以ICR小鼠為試驗(yàn)對象,連續(xù)灌服低、中、高劑量的水酶法提取核桃油及中劑量核桃油-β-環(huán)糊精微囊、中劑量冷榨核桃油4周后進(jìn)行試驗(yàn)。Morris水迷宮結(jié)果顯示,與空白對照組相比,水酶法提取核桃油低、高劑量組可明顯縮短小鼠的逃避潛伏期(P0.05),且均低于陽性對照組,其垮臺次數(shù)及在目標(biāo)區(qū)域停留時間也高于空白組。穿梭箱實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,水酶法提取核桃油高劑量小鼠主動回避反應(yīng)率均高于與空白組及其他樣品組(P0.05),且被動回避反應(yīng)時間縮短明顯(P0.05)。說明水酶提取核桃油對小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善優(yōu)于冷榨法制備的核桃油。
【圖文】：

蜥；Ｘ工夂大考碩士嗲依訟夂逡逑脂肪酸響應(yīng)值有所下降，在載氣流速為１．５Ｌ／ｍｉｎ時，存在基線漂移現(xiàn)象，故選逡逑擇載氣流速為２．０Ｌ／ｍｉｎ。逡逑２．４．１．４．２漂移管溫度的考察逡逑在２．４．１．４．１色譜條件下選擇載氣流速２．０Ｌ／ｍｉｎ，分別考察漂移管溫度５５°Ｃ、逡逑７０°Ｃ、８５°Ｃ時對分離效果的影響，結(jié)果表明，低的檢測溫度雖然有較大的靈敏度，，逡逑但是色譜峰分離效果不佳，高的檢測溫度存在基線漂移現(xiàn)象，因而選擇７０°Ｃ作逡逑為蒸發(fā)光檢測器分析檢測溫度。逡逑綜合以上色譜條件的研究，最終選擇ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ分析條件如下：色譜柱：逡逑ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ－Ｃｉ８（４．６ｘｌ５０ｍｍ邋ｉ．ｄ．，５邋ｊｘｍ），柱溫：３０°Ｃ；流動相：甲醇／水（含邋０．１％逡逑醋酸）（８３：１７，邋ｖ／ｖ）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；蒸發(fā)光散射檢測器溫度：７ＣＴＣ，載逡逑氣（Ｎ２）流量：２．０Ｌ／ｍｉｎ，進(jìn)樣量５ｐＬ。該條件下測得的不同方法制備核桃油逡逑脂肪酸成分的結(jié)果如下圖所示：逡逑ｍＶ邋■逡逑＾

圖２－２核桃油中各脂肪酸ＥＳＩ質(zhì)譜圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋ＥＳＩ邋ｍａｓｓ邋ｓｐｅｃｔｒａ邋ｏｆ邋ｆａｔｔｙ邋ａｃｉｄｓ邋ｉｎ邋ｗａｌｎｕｔ邋ｏｉｌ逡逑從圖２－２中可以看出，Ａ，邋Ｂ，邋Ｃ，邋Ｄ的分子離子峰分別為：２７７．２、２７９．２、逡逑２５５．３、２８１．３，由此可以判斷其對應(yīng)的脂肪酸分別為：亞麻酸、亞油酸、軟脂酸、逡逑油酸。另外從圖中發(fā)現(xiàn)，２［Ｍ－Ｈ］－處對應(yīng)的離子峰豐度相對較高，主要是因?yàn)闃渝义掀窛舛忍�，�?dǎo)致出現(xiàn)了二聚體準(zhǔn)分子離子峰。ＨＰＬＣ－ＭＳ流動相體系中含有逡逑０．１％醋酸，在ＥＳＩ負(fù)離子源中ＣＨ３ＣＯＯＨ易電離失去一個Ｈ＋，與［Ｍ－Ｈ］？結(jié)合產(chǎn)逡逑生了新的離子［［Ｍ－Ｈ］－［ＣＨ３ＣＯＯＨ－Ｈ］］＿，因此在［Ｍ－Ｈ］＿＋５９處出現(xiàn)了相應(yīng)的離子峰。逡逑根據(jù)ＨＰＬＣ－ＭＳ法定性分析了核桃油中脂肪酸成分，依次確定為亞麻酸、亞逡逑油酸、軟脂酸、油酸，分別屬于三不飽和、二不飽和、飽和、單不飽和脂肪酸，逡逑為脂肪酸的定量分析奠定基礎(chǔ)。逡逑２．４．３核桃油中脂肪酸的定量分析逡逑２．４．３．１脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑在２．４．１獲得的最優(yōu)色譜條件下
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285;R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2665595