【摘要】：越來越多的研究表明,植物凝集素對生殖過程中包括受精、胚胎著床、胚胎發(fā)育及妊娠過程等每一個環(huán)節(jié)都會產(chǎn)生影響。本實(shí)驗(yàn)室從事植物凝集素相關(guān)研究已經(jīng)超過十年。研究表明,植物凝集素能安全有效阻止受精、抑制胚胎著床及終止不同時期的妊娠。目的:本研究采用云南紅蕓豆植物凝集素(Red Kidney Bean Lectin,RKBL,or Phytohemmaglutinin,PHA),研究長期使用對小鼠陰道結(jié)構(gòu)和組織形態(tài)的影響作用;觀察RKBL凝膠劑對精子凝集的作用;探究反復(fù)使用RKBL終止妊娠對雌鼠妊娠及其后代發(fā)育的影響;以及觀察給予RKBL后子宮內(nèi)紅蕓豆植物凝集素受體或結(jié)合位點(diǎn)數(shù)量的變化。期望能為研究新型的既能避孕又能預(yù)防包括HIV(Human Immunodeficiency Virus,人類免疫缺陷病毒)在內(nèi)的性傳播疾病的殺微生物劑、研究新型引產(chǎn)藥物和為生殖醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:1、將不同濃度的RKBL通過陰道口注入小鼠陰道。連續(xù)給藥四個月后,斷頸處死小鼠,取下其陰道及周圍組織,制作石蠟切片并經(jīng)蘇木精染色,顯微鏡下觀察陰道上皮及下層組織的形態(tài)學(xué)變化。2、采用Sander-Cramer方法,即在0.5ml含不同濃度RKBL的凝膠劑中,加入0.1ml精液,觀察20s內(nèi)致死精子的最低蕓豆凝集素劑量,并觀察RKBL對精子凝集的有效濃度;在“V”型管底部加入等體積含不同濃度RKBL的凝膠劑,觀察殺精和凝集精子的效果。3、以RKBL重復(fù)處理孕鼠造成2次流產(chǎn)后,觀察對雌鼠第三次妊娠的影響并連續(xù)觀察新生小鼠生長至21d(即斷奶期)的相關(guān)生理及神經(jīng)行為學(xué)指標(biāo)。4、用FITC(Fluorescein Isothiocyanate,異硫氰酸熒光素)標(biāo)記的RKBL凝集素作為探針,研究子宮給藥(RKBL)后對RKBL受體或結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)量及分布的影響。結(jié)果:1、長期(4個月)陰道連續(xù)給予RKBL的實(shí)驗(yàn)組小鼠陰道無炎癥、病變、過敏反應(yīng)等不良現(xiàn)象,陰道粘膜上皮細(xì)胞形態(tài)完好無破損。2、當(dāng)凝膠劑中RKBL濃度高于或等于1mg/ml時,會使精子瞬間失活致死,即Sander-Cramer方法20s內(nèi)致死的最低劑量為1mg/ml;RKBL濃度高于0.01mg/ml時,可以不同程度地凝集精子;3、與對照組比較,使用RKBL重復(fù)流產(chǎn)不影響雌鼠再次妊娠,但是雌鼠的平均產(chǎn)仔數(shù)稍許降低,幼崽生長速度稍快于對照組,其他各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯差異。4、RKBL受體廣泛存在于小鼠子宮,其中在子宮黏膜(即內(nèi)膜)部分熒光反應(yīng)相對較弱,子宮肌層部分和子宮漿膜上熒光較強(qiáng);給予RKBL處理后,受體分布情況發(fā)生變化,子宮黏膜、子宮肌層部分和子宮漿膜上中的熒光反應(yīng)強(qiáng)度均有不同程度的增加,其中子宮壁肌肉中熒光強(qiáng)度增強(qiáng)尤為明顯。結(jié)論:1、紅蕓豆植物凝集素(RKBL)長期作用于陰道安全無不良反應(yīng)。2、1mg/ml為體外殺精的最低RBKL濃度;各低濃度RBKL凝膠均能使精子產(chǎn)生不同程度的凝集;在“V”型管實(shí)驗(yàn)中,各試驗(yàn)濃度的RKBL凝膠劑均能阻止精子穿透。3、RKBL重復(fù)(2次)處理導(dǎo)致流產(chǎn)后,對雌鼠無明顯不良影響,對子代生長發(fā)育無明顯負(fù)面影響。4、RKBL受體廣泛存在于小鼠子宮,給予紅蕓豆植物凝集素刺激后,受體受體在子宮粘膜、子宮肌層和漿膜都在不同程度上增加。
【圖文】：

圖 2.1 小鼠不同濃度 PHA 陰道給藥蘇木精染色陰道切片（圖 2.1A：PBS 組 100×；圖 2.1B：為圖 A 的局部放大 400×；圖 2.1C：1mg/ml 濃度的 PHA 組100×；圖 2.1D：為圖 C 的局部放大 400×；圖 2.1E：2.5mg/ml 濃度的 PHA 組 100×；圖 1F：為圖 E 的局部放大 400×；圖 2.1G：5mg/ml 濃度的 PHA 組 100×；圖 2.1H：圖 G 的局部放大 400×）2.3 討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，對小鼠進(jìn)行長期陰道注入濃度為 2.5mg/只或以下濃度的紅蕓豆植物凝集素（RKBL），不會引起陰道上皮細(xì)胞的不良反應(yīng)，用藥組與對照組沒有明顯差異，應(yīng)用于陰道是安全的。目前市面上還沒有一種安全有效的的殺微生物劑產(chǎn)品。 現(xiàn)階段很多已經(jīng)進(jìn)人體臨床試驗(yàn)的藥物一般都是凝膠劑型或生物黏附劑型的[41]。常見的殺精子劑為壬苯醇醚-9 或 N9，但壬苯醇醚-9 會引起陰道上皮細(xì)胞的破損，而陰道上皮的損傷，又將會增加包括 HIV-1 在內(nèi)的病毒的感染風(fēng)險。并且已有實(shí)驗(yàn)證明苯醇醚-9

圖 3.1 含不同濃度 RKBL 的凝膠劑凝集精子圖片（圖 3.1A：含 5mg/ml RKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1B：含 2.5mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1C：含1mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1D：含0.5mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1E：含0.25mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1F：含0.1mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1G：含0.05mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1H：含0.025mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1I：含0.01mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1J：含0.005mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×；圖 3.1K：含 0.0025mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1L：含不 0.001mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，，右下角小圖為其局部放大 400×）3.2.2 “V 型管”穿透試驗(yàn)結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：云南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2662961