發(fā)布時間：2020-05-13 01:46

【摘要】：大蔥(Allium fistulosum L)作為常見食物及輔食香料中的一種,因其具有抗菌解毒去腥的功效備受人們青睞。傳統(tǒng)中醫(yī)認為蔥屬溫性,具有祛除風寒、康健脾胃以及殺菌的功效,還可祛痰、利肺通陽、促進排汗解表、鎮(zhèn)痛療傷、疏通乳腺、快速止血。因此大蔥作為藥食兩用品應用十分廣泛。目前大蔥的生物活性研究比較稀少,實際應用領域相對較窄,為了更加充分的利用和開發(fā)大蔥天然資源,本研究以大蔥為原料,通過工藝優(yōu)化得到大蔥乙醇提取物(E001),用有機溶劑萃取法將大蔥醇提物粗分為石油醚萃取物(F001)、乙酸乙酯萃取物(F002)、正丁醇萃取物(F003)和水溶物(F004)4個溶劑極性部位,對大蔥乙醇提取物和各極性部位體外降糖活性和抗菌活性進行了篩選,并初步探討了大蔥F002部位對HepG_2細胞胰島素抵抗模型糖代謝的作用機制;同時對大蔥乙醇提取物和各極性部位進行抗菌活性研究,并且對經(jīng)過工藝優(yōu)化提取大蔥的揮發(fā)性成分進行了抗菌活性和化學成分分析。(1)以經(jīng)鑒定為Allium fistulosum L的市售普通大蔥為原料,以總黃酮含量和浸膏得率為評價指標,乙醇為溶劑,利用回流提取的方法提取得到大蔥乙醇提取物(E001),采用單因素實驗和正交實驗對乙醇濃度,料液比,回流時間這三個因素進行考察,得到最優(yōu)回流提取條件為:采用1:20料液比、60%乙醇在80℃下水浴加熱回流提取4小時。以優(yōu)化后的提取方案得到乙醇提取物(E001),依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇逐步萃取分別得到4個不同極性部位,即石油醚萃取物(F001)、乙酸乙酯萃取物(F002)、正丁醇萃取物(F003)和水溶性部位(F004)。(2)由于發(fā)生葡萄糖代謝主要部位在肝臟,因此選用HepG2細胞研究大蔥各部位降糖作用。采用高濃度的葡萄糖誘導HepG2細胞產(chǎn)生胰島素抵抗,大蔥乙醇提取物(E001)和4個不同極性部位通過葡萄糖氧化酶法進行初篩,最后選取能夠增加胰島素抵抗細胞模型對葡萄糖吸收的F002作為實驗對象、通過葡萄糖氧化酶法檢測F002對胰島素抵抗細胞模型的葡萄糖攝取量、四哩鹽比色試驗(MTT)檢測F002對細胞毒性和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測胰島素信號通路相關蛋白表達。實驗結果顯示誘導胰島素抵抗模型的最佳葡萄糖濃度為40 mmol/L,且通過驗證實驗驗證葡萄糖抵抗模型構建成功。F002濃度在20-80 mg/mL干預胰島素抵抗模型細胞時,可以增加細胞對葡萄糖的攝取量,且在相同濃度下細胞存活率保持在80%以上,說明F002在此濃度下對細胞毒性較小且有效;Western blot檢測結果表明F002可以調(diào)節(jié)因胰島素抵抗細胞中p-IRS-1水平的升高、IRS-1、IRβ和GLUT2水平下降的情況,從而改善胰島素抵抗。(3)選取金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌、鮑曼不動桿菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和蘇云金桿菌8種廣譜細菌,用濾紙片法對乙醇提取物及不同極性部位高低濃度(0.1 g/mL和0.05 g/mL)進行抑菌活性測定,有抑菌活性的部位進一步測定其最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。結果:高低濃度E001和F001對8種細菌均有較強抑菌作用,尤其是F001對銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌極強,MIC值為3.125 mg/mL,MBC值在50 mg/mL;F002對8種細菌均有明顯抑菌效果,尤其是對和肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌和大腸桿菌抑菌效果極強;F003抑菌效果最差,低濃度下只對肺炎克雷伯菌有抑制作用,而高濃度下也對銅綠假單胞菌和糞腸球菌無抑制作用。F004抑制細菌生長能力較弱,但對金黃色葡萄球菌抑制作用最明顯。(4)以超聲輔助水蒸氣蒸餾的方法提取大蔥揮發(fā)性成分,以揮發(fā)性成分提取率為評價指標,通過單因素實驗和正交實驗對超聲時間,料液比和提取時間進行考察,運用GC-MS對其主要化學成分進行鑒定并對提取獲得的大蔥揮發(fā)性成分進行抗菌活性評價。結果:大蔥揮發(fā)性成分提取最佳工藝為超聲40 min,料液比1:3,蒸餾時間3 h。大蔥揮發(fā)性成分實際提取率為0.0416%。通過GC-MS分析,NIST質(zhì)譜庫檢索,鑒定了其中42個主要化合物,占總揮發(fā)性成分質(zhì)量分數(shù)為99.99%,運用峰面積歸一法確定各個組分的含量,其中主要物質(zhì)為含硫化合物,含量較多的是氟胞嘧啶、烯丙基異丙基硫醚、丙烯基甲基硫醚,二甲基三硫化物、二丙基三硫化物、四硫化物、噻吩、噻烷和噻唑類。生物活性評價實驗表明大蔥揮發(fā)性成分對所選取的8種菌株均有很好的活性。(5)采用淀粉和糊精作為輔料,90%乙醇作為潤濕劑對大蔥乙醇總提物進行制粒,研究大蔥提取物硬膠囊制備工藝。結果:按照最佳提取工藝大量提取,回收乙醇,在真空干燥箱中干燥至恒重,稱取16.2 g干燥大蔥總提取物粉末,添加4.9 g淀粉,4.9 g糊精,混勻,用90%乙醇作為潤濕劑進行濕法制粒,60℃真空干燥后,制粒,過40目篩,200目篩除去細粉,濕度低于60%環(huán)境下將藥粉顆粒裝入3號膠囊,制粒100粒,測得每粒膠囊含總黃酮5 mg。即成大蔥提取物膠囊。
【圖文】：

法分離純化得到兩種化合物，并命名為紅蔥乙素和異紅蔥乙素，鑒定結構如下：圖1-1 紅蔥中兩種蒽醌類化合物紅蔥乙素和異紅蔥乙素Fig.1-1 Red onion in two anthraquinones red onion B and allium red onion B prime1.3.3 黃酮類成分自然界中，黃酮類化合物存在于幾乎所有植物中，因為植物的生長、發(fā)育、開花、結果與它息息相關，黃酮類化合物也廣泛應用于治療心血管疾病，，還有多種功效，因此對它的研究顯得格外重要，大多數(shù)研究天然產(chǎn)物的科研工作者，都主要提取其黃酮類成分來研究其各種生物學活性。對大蔥的黃酮類化合物研究不多，董勇U喌萚18]提取大蔥黃酮類成分，利用各種柱色譜進行分離純化，得到 6 種黃酮類成分

保健劑提供功效實驗說明。對于大蔥活性研究非常有必要，可為大蔥后續(xù)開發(fā)推廣具有實踐意義。圖1-2 大蔥提取物中6種黃酮類化合物Fig.1-2 Allium fistulosum L extract 6 flavonoids
【學位授予單位】：武漢工程大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285

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