【摘要】：據(jù)報(bào)道,糖尿病病人的數(shù)量每年都在逐漸增加,形勢(shì)十分嚴(yán)峻。本課題所研究的核桃楸葉,是胡桃科胡桃屬植物核桃楸(Juglans Mandshurica Maxim.)的樹(shù)葉。據(jù)報(bào)道,核桃楸植物的樹(shù)根、樹(shù)皮,葉、青果皮,果仁均可入藥,主要用于治療抗腫瘤,抗氧化,降血糖等疾病。近些年來(lái),人們對(duì)核桃楸樹(shù)皮、根皮、果皮和果實(shí)的化學(xué)成分及其藥理作用研究報(bào)道比較多,但對(duì)核桃楸葉的深入研究報(bào)道比較少,為了進(jìn)一步確定核桃楸葉降血糖的活性物質(zhì)及其作用機(jī)理,特對(duì)核桃楸葉進(jìn)行深入的研究。目的:基于中藥譜效學(xué)確定核桃楸葉降血糖有效部位、有效成分及其作用。方法:采用系統(tǒng)溶劑法制備核桃楸葉乙醇提取物的不同溶劑萃取部位:建立體外α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性測(cè)定模型,測(cè)定核桃楸葉乙醇提取物各萃取部位降血糖活性,確定核桃楸葉降血糖有效部位;基于中藥譜效學(xué),運(yùn)用靶向親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)快速篩選核桃楸葉活性部位中的降血糖的潛在活性成分:建立體外活性篩選模型對(duì)潛在活性成分進(jìn)行單體活性測(cè)定;基于分子對(duì)接技術(shù)對(duì)核桃楸葉中α-葡萄糖苷酶抑制活性成分與α-葡萄糖苷酶分子作用機(jī)制的研究。結(jié)果:體外酶活性抑制試驗(yàn)顯示,核桃楸葉乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位在體外有明顯的抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶作用,其最大半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為0.014 mg/ml和0.130 mg/ml,均強(qiáng)于陽(yáng)性藥阿卡波糖(IC50分別為0.044 mg/ml和0.158 mg/ml);采用靶向親和-液質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)篩選核桃楸葉中能夠抑制α-葡萄糖苷酶的活性成分,篩選出15種具有潛在抑制α-葡萄糖苷酶的活性成分并推測(cè)了其中8種化合物結(jié)構(gòu),根據(jù)親和度大小,選取前6種單體化合物進(jìn)行單體活性驗(yàn)證,其中山奈酚,槲皮素,沒(méi)食子酸抑制活性均強(qiáng)于陽(yáng)性藥阿卡波糖,有價(jià)值作為重點(diǎn)活性成分進(jìn)一步研究;采用靶向親和-液質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)篩選核桃楸葉中能夠抑制α-淀粉酶的活性成分,篩選出11種具有潛在抑制α-淀粉酶的活性成分并推測(cè)了其中5種化合物結(jié)構(gòu)。根據(jù)親和度大小,選取前4種單體化合物進(jìn)行單體活性驗(yàn)證,其中山奈酚抑制活性強(qiáng)于陽(yáng)性藥阿卡波糖,是核桃楸葉主要的α-淀粉酶抑制活性成分:基于分子對(duì)接技術(shù),從抑制活性和對(duì)活性單體的選擇性指數(shù)綜合評(píng)價(jià),山奈酚為最優(yōu)化合物,槲皮素、沒(méi)食子酸、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷次之,它們均強(qiáng)與阿卡波糖。山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄喃葡萄糖苷和槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷較差,均弱與阿卡波糖。結(jié)論:通過(guò)體外酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn),初步確定核桃楸葉乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位應(yīng)為核桃楸葉降血糖的有效部位,通過(guò)靶向親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)初步推斷核桃楸葉乙酸乙酯層中有8種潛在的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分,針對(duì)其中6種潛在的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分進(jìn)行體外單體活性測(cè)定,結(jié)果表明6種潛在的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分對(duì)α-葡萄糖苷酶均有抑制作用,而且其中山奈酚、槲皮素和沒(méi)食子酸的抑制活性好于阿卡波糖,可以作為有效的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分;通過(guò)靶向親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)初步推斷核桃楸葉乙酸乙酯層中5種潛在的α-淀粉酶抑制活性成分,針對(duì)其中4種潛在的α-淀粉酶抑制活性成分進(jìn)行體外單體活性測(cè)定,結(jié)果表明4種潛在的α-淀粉酶抑制劑對(duì)α-淀粉酶均有抑制作用,而且其中山奈酚抑制活性比阿卡波糖好,可以作為有效的α-淀粉酶抑制活性成分�；诜肿訉�(duì)接技術(shù)對(duì)核桃楸葉中潛在的α-葡萄糖苷酶抑制活性成分的抑制活性機(jī)理進(jìn)行研究,山奈酚等6種成分均能和α-葡萄糖苷酶進(jìn)行結(jié)合,根據(jù)對(duì)接位點(diǎn)信息可以預(yù)測(cè)該類(lèi)化合物降血糖活性的作用機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R284;R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2660429