【摘要】：第一部分五酯膠囊對大鼠體內(nèi)阿帕替尼藥物代謝動力學(xué)的影響目的:建立測定大鼠血漿中阿帕替尼藥物濃度檢測方法,探討單次和多次服用五酯膠囊對大鼠體內(nèi)阿帕替尼藥物代謝動力學(xué)的影響。方法:將24只大鼠按照體重隨機(jī)分為四組:阿帕替尼對照組;單次五酯膠囊聯(lián)合阿帕替尼實(shí)驗(yàn)組;連續(xù)7天生理鹽水聯(lián)合阿帕替尼對照組;連續(xù)7天五酯膠囊聯(lián)合阿帕替尼實(shí)驗(yàn)組。按照五酯膠囊450 mg·kg~(-1)劑量,甲磺酸阿帕替尼50 mg·kg~(-1)的劑量灌胃給藥,根據(jù)設(shè)定時(shí)間采血,經(jīng)甲醇沉淀蛋白后進(jìn)樣分析。色譜條件:Waters XBridge BEH C18色譜柱(2.1×100mm,2.5μm);流動相:乙腈-0.1%甲酸水溶液(45:55,V/V);流速:0.3 mL·min~(-1),進(jìn)樣量:2μL。質(zhì)譜條件:ESI源,正離子檢測模式,多反應(yīng)模式監(jiān)測(MRM);采用非房室模型,利用DAS 2.1軟件計(jì)算藥物代謝動力學(xué)參數(shù),并用SPSS 18.0軟件比較各組藥物代謝動力學(xué)參數(shù)的差異。結(jié)果:阿帕替尼在2~2000 ng·mL~(-1)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,方法學(xué)均符合要求。藥代動力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明,單次服用五酯膠囊聯(lián)合阿帕替尼與單用阿帕替尼對照組比較C_(max)和AUC_(0-24h)分別增加約102%、315%,CL_Z降低約78%;連續(xù)7天服用五酯膠囊聯(lián)合阿帕替尼與連續(xù)7天生理鹽水聯(lián)合阿帕替尼對照組比較C_(max)和AUC_(0-24h)分別增加約52%、169%,CL_Z降低約61%。結(jié)論:本試驗(yàn)建立了靈敏度高,專屬性強(qiáng)的UPLC-MS/MS方法,用于檢測大鼠體內(nèi)阿帕替尼的血漿藥物濃度,并應(yīng)用于五酯膠囊對阿帕替尼藥物代謝動力學(xué)影響的研究。結(jié)果表明,單次或多次給予五酯膠囊均可增加大鼠體內(nèi)阿帕替尼的暴露量。第二部分五味子乙素與阿帕替尼協(xié)同抗腫瘤作用的研究目的:研究五味子乙素與阿帕替尼合用協(xié)同抗腫瘤作用及作用機(jī)制。方法:采用CCK-8方法分別考察阿帕替尼、五味子乙素及二藥聯(lián)用對SGC-7901胃癌細(xì)胞增殖的影響;采用劃痕試驗(yàn)分別評價(jià)阿帕替尼、五味子乙素及二藥聯(lián)用對SGC-7901胃癌細(xì)胞遷移的影響;采用transwell試驗(yàn)分別考察阿帕替尼、五味子乙素及二藥聯(lián)用對SGC-7901胃癌細(xì)胞侵襲的影響;采用流式細(xì)胞術(shù)分別研究阿帕替尼、五味子乙素及二藥聯(lián)用對SGC-7901細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響,采用Western Blot分別考察阿帕替尼、五味子乙素及二藥聯(lián)用對SGC-7901細(xì)胞MMP-9、Bax、Caspase-9、Caspase-12蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:阿帕替尼和五味子乙素對SGC-7901細(xì)胞增殖具有劑量依賴性抑制作用,五味子乙素與阿帕替尼合用可通過將細(xì)胞阻滯在G1期,增強(qiáng)對細(xì)胞增殖的抑制作用;可通過抑制MMP-9蛋白表達(dá)增強(qiáng)對SGC-7901細(xì)胞遷移和侵襲活性的抑制作用;可通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白(Bax、Caspase-9、Caspase-12)的表達(dá)增強(qiáng)對凋亡的促進(jìn)作用。結(jié)論:阿帕替尼合用五味子乙素可增強(qiáng)抑制SGC-7901細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的作用以及阿帕替尼促進(jìn)凋亡的作用,這種協(xié)同抗腫瘤作用可能與MMP-9、Bax、Caspase-9、Caspase-12蛋白表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 阿帕替尼，卡馬西平色譜圖Fig.1 Chromatograms of apatinb and carbamazepine(I) blank plasma; (II) standard plasma sample; (III) plasma sample afterapatinib administration for 1 h; (Ⅳ) plasma sample after apatinib and WuzhiCapsule administration for 1 h（Aapatinib；B carbamazepine）1.2 線性和定量下限阿帕替尼：y=7.7×10－3x+1.24×10－5（r=0.998 1），，線性范圍為 2-2 000ng.mL-1，定量下限為 2.0 ng·mL-1，RSD 為 3.57%。1.3 精密度與準(zhǔn)確度阿帕替尼的各質(zhì)控樣品的日內(nèi)、日間 RSD 均小于 10%，準(zhǔn)確度為94.93%～104.68%，符合生物樣品定量分析要求[8]，詳見表 1。表明該分析方法重現(xiàn)性較好，可用于測定阿帕替尼的藥物濃度。

融 3 次后各樣品實(shí)測質(zhì)量濃度與理論濃度的比值為 92.81%～108.11%（RSD＜10%，n=6），表明各樣品在上述條件下穩(wěn)定性良好。2 藥物代謝動力學(xué)結(jié)果2.1 單次服用五酯膠囊對阿帕替尼藥物代謝動力學(xué)影響用 DAS2.1 軟件的非房室模型對對照組 I（單用阿帕替尼組）、實(shí)驗(yàn)組 I（五酯膠囊單次+阿帕替尼組）結(jié)果進(jìn)行藥物代謝動力學(xué)參數(shù)的計(jì)算,結(jié)果見表 3，以平均血藥濃度值為縱坐標(biāo)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制平均血藥濃度-時(shí)間曲線圖（圖 2）。A B
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2656525